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目的:通过比较正常成年未妊娠、不同孕次妊娠及产后不同天数(孕1次至孕4次)TA2小鼠的血清中E2(雌二醇)和P(孕酮)的浓度变化及乳腺组织中FGF-1的表达情况,探讨血清中E2和P的浓度与乳腺FGF-1表达水平的相关性,分析孕次数与乳腺癌发生的关系;并通过检测外源性E2和P对去势小鼠乳腺中FGF-1表达的影响进一步验证E2和P与乳腺FGF-1表达水平的关系;最后通过比较TA2小鼠的正常乳腺、癌前病变乳腺和乳腺癌组织中FGF-1和FGFR1的表达差异,探讨FGF-1和FGFR1在TA2小鼠自发性乳腺癌发生中作用。方法:1.收集首次妊娠分娩前后不同时间点TA2小鼠的乳腺,利用Real-time PCR和免疫组化方法检测FGF-1的表达;结合小鼠血清中E2和P的浓度测定结果,探讨在妊娠及分娩后不同时期血清E2和P浓度与FGF-1表达水平之间的相关性。2.制作20只去势TA2小鼠模型(摘除卵巢),随机分为雌激素组、孕酮组、雌孕激素联合给药组和对照组,每组5只。给药剂量为去势小鼠血清E2和P水平达到妊娠10-15天左右体内激素水平。给药30天后检测各组小鼠乳腺组织中FGF-1的表达,验证E2和P对FGF-1表达的影响。3.收集8月龄正常未妊娠TA2小鼠、第一次妊娠到第四次妊娠孕20天小鼠及第一次妊娠到第三次妊娠产后42天小鼠各5只,利用HE和卡红染色观察各组小鼠乳腺形态变化;利用电化学发光法测定各小鼠血清中E2和P浓度;利用Real-time PCR和免疫组化方法测定各小鼠乳腺中FGF-1、cyclinD1的表达。4.收集17例TA2自发性乳腺癌小鼠的癌组织和癌前病变组织、7只正常TA2成年雌鼠的乳腺组织,利用Real-time PCR和免疫组化方法比较各组织中FGF-1、FGFR1、cyclinD1的表达差异。结果:1.E2和P随着妊娠天数的增加而增加,孕15天两者达到最高,然后E2和P均下降,哺乳结束时下降到妊娠前水平;孕5天时FGF-1表达水平较高,尔后下降,至孕10天时又开始上升,至孕15天时达到最高,此后呈下降趋势,直至哺乳结束时降至未妊娠水平。从雌孕激素和FGF-1的变化趋势可以得出,除孕5天外,其它各时间点,雌孕激素浓度变化和FGF-1表达水平变化趋势相似。2.外源性E2和P与去势小鼠乳腺中FGF-1表达的关系E2和P均可促进乳腺FGF-1mRNA和蛋白的表达,其中联合给药组乳腺FGF-1表达水平最高、E2组次之、然后是P组、对照组最低,三个实验组与对照组比较差异均具有统计学意义(均P<0.05);而且联合给药组小鼠乳腺中FGF-1的表达均显著高于雌二醇和孕酮单独给药组(均P<0.01);但E2组和P组间无显著差异(P>0.05)。3.随着妊娠次数的增加,孕20天的小鼠乳腺组织形态结构发生改变,逐渐出现明显的增生现象,表现为排布紧密的上皮细胞团;TA2小鼠血清中E2和P浓度也增加,尤其是E2,第四次妊娠时血清E2浓度较第一、二次妊娠有显著的增加(均P<0.01),此外,第四次妊娠时血清P浓度也明显高于第一次妊娠(P<0.05);对应的乳腺组织内FGF-1和cyclinD1表达水平呈相同变化趋势。4.妊娠次数与乳腺复旧的关系孕1次或2次的已复旧乳腺(产后42天)与正常乳腺形态学无明显改变,孕3次时复旧的乳腺形态结构发生改变,可出现局部复旧不全或增殖,而8月龄处女鼠乳腺均无明显增殖;产后42天小鼠血清中E2和P浓度随着产次的增加而升高,但差异不具有统计学意义(均P>0.05),8月龄处女鼠血清E2和P浓度与1产后小鼠相近;孕3次复旧乳腺中FGF-1和cyclinD1的表达水平明显高于孕1次复旧乳腺和8月龄处女鼠乳腺(均P<0.05)。5.TA2自发性乳腺癌小鼠的癌前病变组织和癌组织中FGF-1、FGFR1和cyclinD1表达均高于正常乳腺(均P<0.05);cyclinD1在瘤组织中的表达高于癌前病变(P<0.05);而在癌前病变组织中FGFR1的表达高于乳腺癌组织(P<0.05)。结论:1.E2和P均可促进乳腺组织FGF-1表达,而且两者间可能存在协同作用。2.TA2小鼠血清中E2和P浓度与乳腺组织中FGF-1表达水平之间存在相似的变化趋势,妊娠时较高水平的E2和P可能通过上调乳腺组织中FGF-1的表达促进乳腺上皮细胞的增殖。3.乳腺增殖程度和复旧不全现象随妊娠次数增多逐渐加重,可能与E2和P上调FGF-1后促进cyclinD1表达有关。因此,妊娠次数的增加可能促进TA2小鼠自发性乳腺癌的发生。4.在乳腺癌发生的早期,FGF-1和FGFR1可能参与了TA2小鼠自发性乳腺癌的发生,其作用的发挥可能是通过调节细胞周期、促进细胞增殖而实现的。