芪黄煎剂对大鼠胃切除肠淋巴细胞归巢过程的影响

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目的:通过动物实验,建立胃切除手术创伤模型,小肠内滴注芪黄煎剂干预后,观察芪黄煎剂对胃切除后肠淋巴细胞归巢过程的影响,为中医中药解决现代危重疾病奠定基础。方法:通过建立大鼠胃切除手术创伤模型和假手术模型,将大鼠随机分为三组:(1)假手术组:仅给予腹部正中切开后缝合,不行胃切除。手术后自由饮水进食,不给予肠内营养和中药。(2)对照组:大鼠胃切除手术创伤模型建立后,置于代谢笼内,清醒后笼内自由活动,手术当天禁食。术后第1天起,通过微量注射泵予以肠内营养。肠内营养制剂选用能全素。滴注营养液前滴注生理盐水6ml。持续1周。(3)芪黄煎剂组:滴注的营养制剂、热量、方法、疗程均同单纯肠内营养组,同时滴注中药芪黄煎剂。在滴注营养液能全素前给予6ml芪黄煎剂,通过肠内输液泵使用10ml注射器从硅胶管匀速持续注入小肠内,持续1周。疗程结束后,处死大鼠,分离标本:(1)淋巴细胞归巢数量检测:将从肠系膜淋巴管引流淋巴液铬酸钠(Na2[51Cr]O4)标记后,并用γ计数器检测至其放射计数稳定。将放射计数稳定51Cr标记后的淋巴细胞从股静脉缓慢输入体内。1小时后用γ计数器检测并计算肠黏膜组织和淋巴组织标本中51Cr标记淋巴细胞数和总量。(2)淋巴液中T淋巴细胞的观察:通过直接引流出肠淋巴干中淋巴液,采用流式细胞术检测αβTCR-CD3+T细胞及其亚群CD4+、CD8+T细胞。(3)PP结IgA+B细胞分离与检测:分离出PP结,石蜡切片,免疫组化法检测IgA+B细胞。资料收集:流式细胞仪激发光为488nm氢离子激光,接收通道FS(前向散射)、SS(侧向散射),观察CD3+T细胞、CD4+T、CD8+T细胞亚群的变化,使用Cell-quest软件分析数据。统计方法:应用SPSS17.0统计学软件进行处理,各组样本间数据先进行方差齐性检验,采用的是Levene法,若方差齐,就用单因素设计方差分析,进一步采用t检验进行样本比比较;若方差不齐,即采用非参数样本检验。用均数±标准差(x±s)表示实验所得数据,以P>0.05判定差异有无统计学意义结果:1淋巴细胞归巢数量(各组大鼠PP结、肠系膜淋巴结、小肠弥散淋巴组织三种组织中51Cr量所占总量百分比):大鼠造模后一周,计数器显示淋巴细胞归巢到大鼠PP结、肠系膜淋巴结、小肠弥散淋巴组织三种组织中占总数的百分比.(1)PP结:假手术组为4.93±0.50,对照组为2.85±0.37,对照组百分比明显低于假手术组,差异具有明显显著性(P﹤0.01);芪黄煎剂组为3.24±0.28,百分比也低于假手术组,差异具有明显显著性(P﹤0.01);芪黄煎剂组和对照组相比,芪黄煎剂组淋巴细胞归巢百分比优于对照组,差异具有显著性(P﹤0.05);(2)肠系膜淋巴结:假手术组为3.85±0.28,对照组为2.70±0.54,对照组同假手术组相比,百分比低于假手术组,差异具有明显显著性(P﹤0.01);芪黄煎剂组为3.53±0.40,同假手术组相比,未见显著差异(P>0.05);芪黄煎剂组同对照组相比,百分比高于对照组,差异具有明显显著性(P﹤0.01)。(3)小肠弥散淋巴组织:三组间相互比较均未见明显差异,无统计学意义(P>0.05)。2淋巴细胞归巢T细胞数量(大鼠淋巴液中CD3+T细胞及其亚群CD4+、CD8+T细胞的变化):大鼠造模后1周,各组引流淋巴液经流式细胞仪检测后结果显示(1)CD3+T细胞:假手术组77.24±3.86,对照组67.59±3.99,对照组低于假手术组,差异具有明显显著性(P <0.01);芪黄煎剂组为74.04±3.40,同假手术组相比,差异具有显著性(P <0.05);芪黄煎剂组同对照组相比,差异具有明显显著性(P <0.01)。(2)CD4+T细胞:假手术组54.42±4.09,对照组50.31±3.22,对照组低于假手术组,差异具有明显显著性(P <0.01);芪黄煎剂组为51.11±2.98,同假手术组相比,差异具有显著性(P <0.05);芪黄煎剂组同对照组相比,未见明显差异,无统计学意义(P>0.05)。(3)CD8+T细胞:假手术组25.04±3.94,对照组20.44±5.13,对照组低于假手术组,差异具有显著性(P <0.05);芪黄煎剂组为21.95±6.01,同假手术组及对照组相比,均未见明显差异,无统计学意义(P>0.05)。3淋巴细胞归巢B细胞数量(各组大鼠小肠PP结中IgA+B细胞数的变化):假手术组为69.74±17.682,对照组为41.29±16.623,对照组同假手术组相比较,差异具有显著性(P <0.01);芪黄煎剂组为57.08±10.908,同假手术组比较,比较差异有统计学意义(P <0.05);芪黄煎剂组高于对照组,比较有显著差异(P <0.01)。结论:健脾通里中药芪黄煎剂通过促进胃切除手术后肠淋巴细胞归巢,从而保护肠黏膜免疫屏障,防治细菌移位发生,有助于减少手术创伤后肠源性感染以及SIRS、MODS等发生。
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