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【目的】
本研究目的在于探讨 NEK2 在宫颈癌放疗敏感性中的作用及相关机制。
【方法】
本研究提取了宫颈腺癌和鳞癌等细胞株胞内蛋白行Western Blot实验，明确NEK2在宫颈癌细胞系中的表达水平。于TCGA数据库预测NEK2在宫颈癌与癌旁组织中的表达差异，组织切片免疫组化染色及生存分析探究NEK2在宫颈癌患者癌组织中的表达状态与患者临床特征及预后的关系。应用 SiRNA 技术沉默NEK2 后进行了体外的细胞生长计数、平板克隆和细胞凋亡实验、及 EdU 成像检测细胞增殖实验探索其对宫颈癌细胞生长增殖的影响。运用放疗克隆形成实验及γ-H2AX 焦点实验、彗星实验探究 NEK2 对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响。行Western Blot实验验证相关通路蛋白的变化，探索可能影响NEK2功能的机制。
【结果】
NEK2在宫颈腺癌和鳞癌细胞株中均有表达，TCGA数据库预测NEK2在宫颈癌组织内表达明显高于癌旁组织（p=0.003），组织芯片免疫组化染色分析表明宫颈癌患者T分期、淋巴结转移状态与预后相关(p＜0.001），且NEK2在宫颈癌患者癌组织中表达高于癌旁，其表达状态与宫颈癌 T 分期、淋巴结转移相关(p＜0.05），提示NEK2在宫颈癌中可能也发挥着癌蛋白的角色并与预后呈负相关。SiRNA沉默NEK2后宫颈癌细胞生长显著减慢，增殖克隆数目显著减少(p＜0.05），凋亡细胞比例显著增加(p＜0.05），提示 NEK2 促进了宫颈癌细胞的生长增殖并诱导细胞凋亡。EdU成像检测细胞增殖实验中，沉默组与对照组相比， EdU信号明显减少(p＜0.05），表明沉默NEK2之后，处于增殖期的细胞明显减少，进一步验证了沉默NEK2抑制了宫颈癌细胞的增殖能力。放疗克隆形成实验表明在不同放疗剂量下，沉默 NEK2后HeLa和 SiHa 的克隆存活能力较对照组减弱，说明靶向沉默 NEK2 后，两种细胞对放射治疗变敏感。γ-H2AX 焦点实验显示沉默 NEK2后，在放疗后 4h 焦点数量较对照组明显增加(p＜0.01），说明沉默 NEK2 后，DNA 损伤修复减慢，增加了放疗敏感效应。彗星实验中，转染SiNEK2#1和SiNEK2#2组拖尾较对照组显著延长(p＜0.001）。以上研究结果说明靶向沉默 NEK2 增强了放疗导致的 DNA 损伤效应，提高了宫颈癌细胞对放疗的敏感性。在SiHa和HeLa细胞中沉默NEK2 48h后提取蛋白行western blot实验，结果显示沉默NEK2后SRSF、TRF-1、β-catenin蛋白水平均有不同程度的下调，跟之前的报道一致。
【结论】
NEK2 在宫颈癌组织中高表达，并与宫颈癌患者T分期、淋巴结转移相关；靶向NEK2 可抑制宫颈癌细胞的生长与增殖，促进宫颈癌细胞凋亡；靶向NEK2增强宫颈癌细胞的放疗敏感性；NEK2 发挥生物学功能可能通过 TRF-1/SRSF/β-catenin相关通路实现。
本研究目的在于探讨 NEK2 在宫颈癌放疗敏感性中的作用及相关机制。
【方法】
本研究提取了宫颈腺癌和鳞癌等细胞株胞内蛋白行Western Blot实验，明确NEK2在宫颈癌细胞系中的表达水平。于TCGA数据库预测NEK2在宫颈癌与癌旁组织中的表达差异，组织切片免疫组化染色及生存分析探究NEK2在宫颈癌患者癌组织中的表达状态与患者临床特征及预后的关系。应用 SiRNA 技术沉默NEK2 后进行了体外的细胞生长计数、平板克隆和细胞凋亡实验、及 EdU 成像检测细胞增殖实验探索其对宫颈癌细胞生长增殖的影响。运用放疗克隆形成实验及γ-H2AX 焦点实验、彗星实验探究 NEK2 对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响。行Western Blot实验验证相关通路蛋白的变化，探索可能影响NEK2功能的机制。
【结果】
NEK2在宫颈腺癌和鳞癌细胞株中均有表达，TCGA数据库预测NEK2在宫颈癌组织内表达明显高于癌旁组织（p=0.003），组织芯片免疫组化染色分析表明宫颈癌患者T分期、淋巴结转移状态与预后相关(p＜0.001），且NEK2在宫颈癌患者癌组织中表达高于癌旁，其表达状态与宫颈癌 T 分期、淋巴结转移相关(p＜0.05），提示NEK2在宫颈癌中可能也发挥着癌蛋白的角色并与预后呈负相关。SiRNA沉默NEK2后宫颈癌细胞生长显著减慢，增殖克隆数目显著减少(p＜0.05），凋亡细胞比例显著增加(p＜0.05），提示 NEK2 促进了宫颈癌细胞的生长增殖并诱导细胞凋亡。EdU成像检测细胞增殖实验中，沉默组与对照组相比， EdU信号明显减少(p＜0.05），表明沉默NEK2之后，处于增殖期的细胞明显减少，进一步验证了沉默NEK2抑制了宫颈癌细胞的增殖能力。放疗克隆形成实验表明在不同放疗剂量下，沉默 NEK2后HeLa和 SiHa 的克隆存活能力较对照组减弱，说明靶向沉默 NEK2 后，两种细胞对放射治疗变敏感。γ-H2AX 焦点实验显示沉默 NEK2后，在放疗后 4h 焦点数量较对照组明显增加(p＜0.01），说明沉默 NEK2 后，DNA 损伤修复减慢，增加了放疗敏感效应。彗星实验中，转染SiNEK2#1和SiNEK2#2组拖尾较对照组显著延长(p＜0.001）。以上研究结果说明靶向沉默 NEK2 增强了放疗导致的 DNA 损伤效应，提高了宫颈癌细胞对放疗的敏感性。在SiHa和HeLa细胞中沉默NEK2 48h后提取蛋白行western blot实验，结果显示沉默NEK2后SRSF、TRF-1、β-catenin蛋白水平均有不同程度的下调，跟之前的报道一致。
【结论】
NEK2 在宫颈癌组织中高表达，并与宫颈癌患者T分期、淋巴结转移相关；靶向NEK2 可抑制宫颈癌细胞的生长与增殖，促进宫颈癌细胞凋亡；靶向NEK2增强宫颈癌细胞的放疗敏感性；NEK2 发挥生物学功能可能通过 TRF-1/SRSF/β-catenin相关通路实现。