GA对老山芹种子后熟过程及GA20氧化酶基因表达的影响

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老山芹(Heracleum dissectum Ledeb)为伞形科独活属草本植物,学名兴安独活。老山芹植物喜阴冷,多分布于我国东北及华北林区,在俄罗斯、朝鲜等国家均有分布。老山芹有较高的营养价值,富含大量维生素A、维生素C、糖、蛋白质等物质。同时兼具食用和药用价值,其茎和嫩叶口味鲜美,做法多样,是一种绿色健康的保健蔬菜。其根部可入药,可用于治疗风湿病、高血压、腰膝酸痛等病症。随着人们对山野菜的重视程度逐渐加大,老山芹等野生植物开始被熟知。由于人们对山野菜的需求量与日俱增,野生资源供不应求,人工栽培老山芹十分必要。老山芹种胚发育不完全,播种后种子发芽率低且育苗周期长,成为老山芹规模化人工栽培的限制因素。针对老山芹种子休眠特性,本研究以老山芹种子为试验材料,在变温层积的基础上结合外源GA处理,定期取样,观察种子后熟过程种胚的形态变化,测定形态指标和生理生化指标,以期找到解除老山芹种子休眠的最佳处理方式,为老山芹产业化发展提供理论依据和技术支撑。GA20氧化酶是GA合成途径中的限速酶,对GA20ox进行生物信息学分析,并测定了不同浓度GA处理下GA20ox的相对表达量,为后期探寻老山芹休眠分子机制奠定理论基础。结果表明:(1)老山芹种子采收后种胚尚未完成后熟过程,多数处于心形胚时期,层积前利用GA浸种能使种胚提前完成形态后熟。其中处理三(400 mg·L-1GA)与对照相比能使种胚提前30d左右完成形态后熟过程。(2)种子解除休眠过程中伴随着物质代谢的变化,各处理下淀粉和粗脂肪在解除休眠过程中呈下降趋势;可溶性糖表现为先升后降的趋势;可溶性蛋白层积过程中变化起伏较大,表现为先升后降再升再降的趋势。(3)GA20ox生物信息学分析:GA20ox基因全长1131 bp,共编码364个氨基酸;该蛋白主要定位于细胞质,其表达产物为稳定的亲水性蛋白;二级结构预测显示为mixed型蛋白;同源序列比对结果表明GA20ox氨基酸序列在不同物种中同源性较低;系统进化树结果表明,GA20ox与人参亲缘关系最近,与牡丹、银白杨等亲缘关系较远。(4)qRT-PCR测定层积过程中GA20ox基因的相对表达量,结果显示随着层积时间的延长,GA20ox的表达量逐渐下降,其中200 mg·L-1GA处理后层积15 d时GA20ox表达量最高,而高浓度的GA对GA20ox表达量有抑制作用。
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