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目的研究芪蟾口服结肠靶向片中有效组分的最佳纯化工艺,并进一步研究有效组分对结肠癌CT-26细胞增殖抑制作用及对促凋亡基因Bax、抗凋亡基因Bcl-2、血管生成相关因子VEGF和HIF-1α表达的影响,以探讨其体外抗结肠癌作用。为后续体内实验研究工作的展开提供实验基础,为芪蟾口服结肠靶向片用于临床结肠癌的预防、治疗、康复提供理论依据。方法采用大孔吸附树脂法对黄芪总皂苷和苦参生物碱进行纯化;采用硅胶柱层析法对干蟾皮中的酯蟾毒配基和华蟾酥毒基进行纯化。采用MTT法检测芪蟾口服结肠靶向片中有效组分对结肠癌CT-26细胞增值抑制作用的影响。采用荧光定量PCR法检测芪蟾口服结肠靶向片中有效组分对凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达的影响。采用Western blot法检测芪蟾口服结肠靶向片中有效组分对血管生成相关因子VEGF和HIF-1α表达的影响。结果黄芪总皂苷的最佳纯化工艺为选用AB-8大孔吸附树脂,上样量为220mL(生药浓度0.2g/mL),洗脱时先用蒸馏水洗至无molish反应再用0.1%NaOH和20%乙醇洗脱除杂,70%乙醇洗脱,洗脱溶剂用量为5BV。苦参生物碱的最佳纯化工艺为采用D101大孔吸附树脂法纯化,上样量为120mL(生药浓度0.2g/mL)。洗脱时先用蒸馏水和20%的乙醇洗脱除杂,再用70%的乙醇洗脱,洗脱用量为5BV。干蟾皮中的酯蟾毒配基和华蟾酥毒基最佳纯化工艺为径高比2:14,上样量10g,洗脱溶剂用量160mL。芪蟾口服结肠靶向片中有效组分对结肠癌CT-26细胞具有明显的增殖抑制作用。芪蟾口服结肠靶向片中有效组分各浓度作用24h、48h、72h,IC50值分别为95.04、49.84、23.67 μg/mL。芪蟾口服结肠靶向片中有效组分对结肠癌CT-26细胞的抑制率具有时间和剂量依赖性。芪蟾口服结肠靶向片中有效组分300.00 μ g/mL药物组与5Fu组比较无统计学差异(P>0.05)。与空白组相比,作用24h、48h、72h后芪蟾口服结肠靶向片中有效组分组及5Fu组Bax基因表达均增强,且有统计学差异(P<0.01,P<0.05),Bcl-2基因表达下调,具有显著性差异(P<0.01)。与5Fu组比,芪蟾口服结肠靶向片中有效组分各组Bax基因表达,具有显著性差异(P<0.01),Bcl-2基因表达有统计学差异(P<0.01,P<0.05)。芪蟾口服结肠靶向片中有效组分对Bax、Bcl-2的表达呈时间和剂量依赖性。作用48h后,与空白组比较,芪蟾口服结肠靶向片中有效组分各浓度组VEGF、HIF-1α蛋白表达均明显下降,具有显著性差异(P<0.01)。与5Fu组比较,VEGF和HIF-1α75.00μ g/mL组无统计学差异(P>0.05)。芪蟾口服结肠靶向片中有效组分各浓度组VEGF和HIF-1α的表达随着浓度的增加而降低,具有统计学差异(P<0.01,P<0.05)。结论大孔吸附树脂法适用于黄芪总皂苷、苦参生物碱的纯化,硅胶柱层析法适用于干蟾皮中酯蟾毒配基和华蟾酥毒基的纯化,经纯化后黄芪总皂苷、苦参生物碱、酯蟾毒配基和华蟾酥毒基纯度提高。芪蟾口服结肠靶向片中有效组分能明显抑制结肠癌CT-26细胞的增殖;能上调促凋亡基因Bax的表达、下调抗凋亡基因Bcl-2的表达,对结肠癌CT-26细胞凋亡具有促进作用;能抑制血管生成相关因子VEGF和HIF-1α的表达,对肿瘤血管生成具有抑制作用。提示芪蟾口服结肠靶向片中有效组分具有体外抗结肠癌的作用。