蝉花降血糖组分分离纯化及功能验证

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蝉花(Cordyceps cicadae)又称大虫草,属于虫生真菌,是一种与冬虫夏草类似的虫草。蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae)属于麦角菌科(Clavicepitaceae)虫草属(Cordyceps),是可以形成虫草蝉花的真菌。蝉花的药理作用有很多,例如免疫调节、抗氧化、抗肿瘤、抗炎镇痛、改善肾功能、降血糖等。为了更好地开发蝉花药用功效,本研究探究了从10株蝉花分离出不同蝉拟青霉的降血糖作用,从中筛选出降血糖效果最优良的菌株,分离其降血糖作用有效组分,并对该优良菌株的液体培养条件进行优化。取得结果如下:蝉花降血糖功效研究与优良菌株筛选:通过建立糖尿病小鼠模型研究不同蝉拟青霉对小鼠的降血糖效果,结果显示蝉拟青霉菌丝体提取液均具有一定的降血糖效果,其中中剂量组(5.00 g/kg)的降血糖效果最佳。通过比较不同菌株的降血糖效果,发现菌株5704s的降血糖效果最好,其血糖下降率为36.85%。蝉花降血糖功效组分的分离:分离提取菌株5704s的多糖和蛋白,使用分子筛层析法对5704s的蛋白进行分离得到峰1和峰2。采用体外试验和小鼠试验测定降血糖有效组分,结果都表明5704s峰1蛋白的降血糖效果最佳,由此确定主要降血糖功效组分是峰1蛋白。并通过SDS-PAGE电泳确定该蛋白的分子量为57781 Da。蝉花降血糖功效组分高产菌株培养条件优化:采用响应面分析法对菌株5704s的液体培养条件进行优化,确定最佳液体培养条件为葡萄糖20 g/L、蛋白胨3 g/L、酵母浸膏2 g/L、KH2PO4 1 g/L、MgSO4 0.5 g/L、pH 7.11、温度22.20℃及接种量8.04%。采用最佳培养条件,菌株5704s峰1蛋白含量达到43.528 mg/L,与优化前5.718 mg/L相比提高了7.612倍。
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