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目的:提取并检测喉癌、下咽癌的exosomes并探讨其临床意义。材料和方法:收集我院2015年2017年22例头颈部癌患者术前外周血,其中喉癌11例,下咽癌11例,并收集11例正常人血液作为对照组,经我院科研伦理审查委员会批准,与患者及家属签署知情同意书,进行人体外周血液标本的以下研究。1.通过采集喉癌、下咽癌患者和正常人的血液,用试剂盒SystemBiosciences(EXOTC10A-1)提取 exosomes。2.采用透射电子显微镜下观察exosome形态。3.采用纳米粒子跟踪分析(Nanoparticle Tracking Analysis,NTA)对exosomes进行计数(即颗粒浓度)和测粒径。4.采用法蛋白浓度定量试剂盒(Bicinchoninicacid,BCA)检测exosomes蛋白浓度。5.采用蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)检测蛋白的表达。6.检测exosomes在头颈部恶性肿瘤患者(喉癌、下咽癌)22例及正常人11例中的表达,其中喉癌为11例、下咽癌11例,所有患者均病理明确诊断,收集11例正常人血液。7.统计学处理:采用SPSS 19.0统计软件。结果:1.从喉癌下咽癌患者的上清液中分离出肿瘤来源的exosomes是可行的。透射电子显微镜下观察exosomes具有杯状结构的特征,它们的直径在30～100 nm之间。2.喉癌组、下咽癌组来源的exosomes体积较对照组来源的exosomes体积更大。3.与对照组来源的exosomes比较,喉癌组、下咽癌组来源的exosomes蛋白浓度显著增加(p<0.05)。通过对照组与恶性肿瘤组(喉癌组+下咽癌组)的蛋白浓度-ROC曲线分析,得出曲线下面积(AUC)=0.926±0.046,当exosome蛋白浓度为2.8842mg/ml时,Youden指数达到最大为0.864。确定2.8842mg/ml为诊断临界值,诊断的敏感度为86.4%,特异性为100%。因此外周血exosomes蛋白浓度可作为喉癌、下咽癌早期诊断的指标之一。4.对照组、喉癌组和下咽癌组的exosomes中均检测到CD63、CD81蛋白,没有检测到Calnexin蛋白。5.对照组、喉癌组和下咽癌组的exosomes中颗粒浓度无明显差异(p>0.05)。与对照组比较,喉癌组exosomes粒径增加,但无显著差异(p>0.05),下咽癌组的exosomes粒径显著增加(p<0.01)。对照组与喉癌组的粒径-ROC曲线分析得出AUC=0.661±0.118,Youden指数最大为0.181,诊断的敏感度为63.6%,特异性为54.5%,敏感度和特异性均不高。但做对照组与下咽癌组的粒径-ROC曲线,得出AUC=0.979±0.024,当粒径为162nm时,Youden指数达到最大为0.818,因此确定162nm为诊断临界值,诊断的敏感度为100%,特异性为81.8%,因此外周血exosomes粒径可作为下咽癌早期诊断的指标之一。结论:喉癌、下咽癌患者外周血清来源的exosomes是十分有潜力的肿瘤标志物,可能对喉癌、下咽癌的早期诊断带来帮助。