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研究背景尽管七氟烷是目前临床上最常用的吸入性麻醉药,但仍有研究显示七氟烷会引起老年动物认知功能障碍,且表现出与某些神经系统退行性病变相似的病理改变。有研究表明自噬作为一种细胞内异常物质的清除途径在神经系统退行性病变中扮演重要角色,但它在七氟烷引起的认知功能障碍中的作用仍然是未知的。实验目的本研究主要探讨海马区自噬在七氟烷引起的老龄大鼠认知功能障碍中的作用。实验方法90只老龄(20月龄)SD雄性大鼠随机分成6组：对照组(CON组)、雷帕霉素组(RAP组)、氯喹组(CQ组)、七氟烷组(SEV组)、七氟烷+雷帕霉素组(SEV+RAP组)、七氟烷+氯喹组(SEV+CQ组)。SEV+RAP、SEV+CQ及SEV组接受2%的七氟烷麻醉5小时,并分别从麻醉前两天起每天腹腔注射20mg/kg的RAP.20mg/kg的CQ及等体积的载体溶液并持续一周。RAP、CQ及CON组在同样的条件下吸入氧气5小时,并分别从吸入氧气前两天起每天腹腔注射20mg/kg的RAP、20mg/kg的CQ及等体积的载体溶液持续一周。麻醉结束后每组各取3只大鼠左心室取血1ml用于血气分析。麻醉后一天开始通过Morris水迷宫实验检测各组老龄大鼠的认知功能,水迷宫实验连续进行5天后,各组随机取6只大鼠,以4%的多聚甲醛灌注固定,其中3只用于电子透射显微镜观察,另外3只用于TUNNEL染色。其余大鼠处死后取新鲜海马组织用于Western Blot实验,检测自噬相关蛋白LC3、p62及凋亡相关蛋白Cleaved-caspase 3、Bax以及Bcl-2的表达水平。实验结果1、七氟烷麻醉引起老年大鼠海马区自噬泡数量、LC3-Ⅱ/Ⅰ比值和p62表达水平增加；凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3、Bax表达上调,Bcl-2表达降低,海马区TUNEL染色阳性细胞增多；空间学习记忆功能下降。2、雷帕霉素使老年大鼠海马区自噬泡数量和LC3-Ⅱ/Ⅰ比值进一步增加,p62表达降低；下调凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3、Bax,上调Bcl-2表达,减少海马区TUNEL染色阳性细胞数量；减轻七氟烷引起的学习记忆功能损伤。3、氯喹进一步上调海马区自噬泡数量、LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、p62及凋亡相关蛋白cleaved caspase3、Bax,并使Bcl-2表达进一步降低,海马区TUNEL染色阳性细胞进一步增加；加重七氟烷引起的学习记忆功能损伤。结论自噬功能障碍可能是七氟烷引起老龄大鼠认知功能障碍的原因之一。通过增强自噬能够缓解七氟烷引起的神经元凋亡及认知功能损伤,抑制自噬会使七氟烷引起的神经元凋亡及认知功能损伤进一步加重,提示自噬干预可能成为预防和改善七氟烷引起的认知功能损伤的一种治疗手段。