金樱子多糖的提取、纯化及其降血脂作用的研究

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近年的大量研究表明,生物体内的多糖具有调节机体免疫、抗肿瘤、抗氧化、降血糖和降血脂等广泛的生理作用。中药金樱子(Rosa laevigata Michx),又名糖罐子,是蔷薇科蔷薇属的一种野生常绿蔓性灌木的果实。在医学上金樱子有着广泛的应用,早在《本草纲目》中就记载有多种功效。金樱子在我国分布广泛、资源丰富,其多糖含量较高,在金樱子的诸多作用中,多糖无疑是其中的主要活性成份之一。因此,开展对金樱子多糖(Rosa laevigata michx polysaccharides,RPs)的分离纯化及其药理作用的研究有着广泛的应用前景。本研究采用正交实验设计,以温度、料液比、提取时间等为变量,预测最佳工艺参数,优化金樱子多糖的最佳提取条件;粗提物经Sevage法脱蛋白,透析法除去小分子,乙醇沉淀,冷冻干燥,得到金樱子多糖粉末;重新水溶解后,采用DEAE-纤维素柱分离纯化,得到三个组份的多糖,经凝胶过滤色谱法,测定其分子量分布范围。利用RPs为受试物,进行体外自由基的清除实验,再利用实验性高脂血症小鼠和大鼠模型,观察RPs及其各组分的降血脂作用。以高脂饲料持续喂小鼠2W,大鼠14W后,采血,直接测定血清的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG),高密度脂蛋白(HDL-C)含量,并由公式计算低密度脂蛋白(LDL-C)和动脉硬化指数(AI)值;采用冰冻切片,光镜观察大鼠动脉的形态学结构的变化。研究结果如下:1.浸提温度、料液比和浸提时间对金樱子多糖的提取率有较显著的影响,粗提最佳温度、料液比及提取时间分别为:95℃、1:10、4h。2.金樱子多糖经纯化分离后,所得三个组份RP1、RP2和RP3的平均分子量分别为: 8300~8600、18500~19000和11000~12500。3.三种多糖组份对超氧阴离子自由基,羟基自由基都有显著的清除作用,但活性强度不同。在对O2-·的清除作用中,RP2的活性最强(EC50=642.7ug/ml),而RPs对·OH清除率最高(EC50=1455.1ug/ml)。在降血脂实验中,饲喂RP2小鼠组具有显著的降血脂活性,与高脂模型组比较,血清中的TC、TG、LDL-C含量和AI均有显著降低(P<0.01),HDL-C含量则显著升高(P<0.01)。在进一步的大鼠实验中,血管的组织形态学对比表明:RP2饲喂组与高脂饮食组相比,动脉粥样硬化病变明显减轻(P<0.05)。综上所述,金樱子多糖RP2有较显著降脂效果,对动脉粥样硬化可能有一定的预防作用,值得进一步深入研究和开发利用。
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