TRAIL慢病毒载体构建及其在肝癌细胞中的表达

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目的:构建携带TRAIL基因的慢病毒表达载体并实现其在肝癌细胞株HepG2中的稳定高表达,检测其对HepG2的增殖影响,观察TRAIL高表达的HepG2在小鼠体内的生长情况。方法:1.利用PCR和双酶切法构建TRAIL重组慢病毒表达载体pCDH-CMV-TRAIL-EF1-GFP-T2A-Puro;2.脂质体法将重组慢病毒载体和包装质粒混合物共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,纯化并测定病毒滴度;3.利用Western blotting检测慢病毒感染HepG2后TRAIL蛋白的表达4.利用MTT检测HepG2细胞的增殖5.利用裸鼠体内实验,检测HepG2细胞在小鼠体内的生长情况。结果:酶切以及测序证实,成功构建携带TRAIL基因慢病毒载体,纯化的慢病毒滴度为1.02×104ifμ/μL,并发现当MOI=8时,重组慢病毒体外转染效率高。利用嘌呤霉素筛选以及单克隆化后,获得稳定表达TRAIL的细胞系,经Western blotting方法检测到TRAIL蛋白的稳定高表达。采用MTT法检测发现稳定转染TRAIL蛋白的HepG2细胞对细胞增殖活力的影响明显低于HepG2和HepG2-con组(P<0.05)。裸鼠体内实验发现HepG2-TRAIL-1的肿瘤体积明显小于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:成功构建了带有TRAIL基因的慢病毒载体,并实现其在HepG2的稳定高表达。通过肝癌细胞和裸鼠体内实验证明了TRAIL基因能够抑制肝癌细胞的生长。
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