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前言持续不卧床腹膜透析(continuous ambulatory peritoneal dialysis,CAPD)是终末期肾脏病(end-stage renal disease, ESRD)的主要替代方式。腹膜透析过程中存在腹膜组织的损害,包括高糖等非生理性透析液、腹膜炎症刺激包括革兰氏阴性杆菌的代表—内毒素脂多糖(LPS),以及糖基化终末产物、PH值、渗透压、革兰氏阳性杆菌和真菌相关腹膜炎等。因此,本文拟采用脂多糖与高糖刺激腹膜间皮细胞,观察相关指标的变化及意义。腹膜间皮细胞表达的细胞因子在腹膜炎症及纤维化过程中起到重要作用。转化生长因子β1(TGF-β1)被认为是CAPD患者腹膜纤维化过程中公认的细胞因子。肿瘤坏死因子α(TNF-α)是CAPD患者腹膜纤维化进程中的另外一个重要的细胞因子。在腹膜炎症与纤维化过程中,TGF-β1与TNF-α均表达上调。TGF-β1是一个复杂的细胞因子,具有多种生物学功能,包括影响细胞的增殖与分化,免疫调节,细胞外基质形成等。同时,TNFα还是一种多效性的细胞因子,在多种环节起着关键的调节作用,通过核因子κB(NF-κB)的活化调节炎症和免疫反应。维生素D受体(vitamin D receptor, VDR)是介导1,25(OH)2D3发挥生物学效应的生物大分子,为一种基因转录调节蛋白,位于细胞核内,属于核受体超家族成员,维生素D受体通过与其配体1,25(OH)2D3结合后,与靶基因启动子区域的维生素D反应成分(vitamin D response element, VDRE)结合,影响mRNA的表达及蛋白质的合成。1,25(OH)2D3除经典的调节钙磷代谢功能外,近年来,越来越多的研究表明1,25(OH)2D3及其类似物在调节细胞的增殖、分化、凋亡与生长过程中起着重要的作用。在多种组织与器官中,1,25(OH)2D3具有抗炎,抗纤维化的潜在作用。因此,我们拟从大鼠腹膜间皮细胞内研究进而探讨LPS及高糖对VDR的表达影响及炎症因子TGF-β1、TNF-α的表达变化和可能机制,进而为防治腹膜炎相关腹膜纤维化提供一定的思路。方法1、实验动物：清洁级SD雄性大鼠,体重120-160克,由中国医科大学实验动物中心提供。2、胰蛋白酶消化法分离培养RPMCs,RT-PCR法检测VDR-mRNA的表达,Western-Blot检测VDR蛋白的表达。ELISA检测上清液TNFα及TGF-β1的表达。3、实验分组(1)正常对照组：只加1%胎牛血清的DMEM/F12培养基；(2)脂多糖作用不同浓度组：不同浓度的脂多糖(0,1,10,100μg／ml)分别作用6h；(3)脂多糖作用不同时间组：10μg／ml脂多糖分别作用0,2,6,12h；(4)LPS+1,25(OH)2D3作用组：10μg／ml脂多糖预孵育2h后,加1,25(OH)2D3 (10-8mol/L,10-7mol/L,10-6mol/L)再作用6h以检测VDR mRNA和蛋白及TNFα、TGF-β1的表达。(5)葡萄糖作用不同浓度组：不同浓度的葡萄糖(1.5%,2.5%,4.25%)分别作用6h；(6)葡萄糖作用不同浓度组：2.5%葡萄糖分别作用0,2,6,12h;(7)葡萄糖+1,25(OH)2D3组：2.5%葡萄糖预孵育2h后,加1,25(OH)2D3(10-8mol/L,10-7mol/L,10-6mol/L)作用6h以检测VDRmRNA和蛋白及TGF-β1的表达。结果1、LPS对RPMCs的VDR表达的影响1μg/ml LPS可使RPMCs的VDRmRNA和蛋白表达减少(P<0.05),100μg/ml LPS作用最强(P<0.01)；10μg/ml LPS作用2小时RPMCs的VDRmRNA和蛋白表达减少(P<0.05),12小时VDRmRNA和蛋白表达最少(P<0.01).2、1,25(OH)2D3对LPS刺激下的VDR表达的影响10-8mol/L 1,25(OH)2D3可上调lOμg/ml LPS预孵育2h后的RPMCs的VDRmRNA和蛋白表达(P<0.01),10-6mol/L的这种上调作用最强(P<0.01)。3、LPS对RPMCs的TNFα、TGF-p1表达的影响LPS组上清液中TNFα、TGF-p1浓度显著高于对照组(P<0.01)；在LPS作用浓度为100μg/ml与作用时间为12小时时达最大(P<0.01)。4、1,25(OH)2D3对LPS刺激下的TNFα、TGF-p1表达的影响1,25(OH)2D3组上清液中TNFα、TGF-β1浓度显著低于LPS组(P<0.01)。10-6mol／L的这种抑制作用最明显(P<0.01)。5、高糖对RPMCs的VDR表达的影响2.5%葡萄糖可使RPMCs的VDRmRNA和蛋白表达减少(P<0.05),4.25%葡萄糖作用最强(P<0.01)；2.5%葡萄糖作用2小时RPMCs的VDRmRNA和蛋白表达减少(P<0.05),12小时VDRmRNA和蛋白表达最少(P<0.01).6、1,25(OH)2D3对高糖刺激下的VDR表达的影响10-8mol/L 1,25(OH)2D3可上调2.5%葡萄糖预孵育2h后的RPMCs的VDRmRNA和蛋白表达(P<0.01),10-6mol/L的这种上调作用最强(P<0.01)。7、高糖对RPMCs的TGF-β1表达的影响高糖组上清液中TGF-β1浓度显著高于对照组(P<0.01)；在葡萄糖浓度为4.25%与作用时间为12小时时达最大(P<0.01)。8、1,25(OH)2D3对高糖刺激下的TGF-β1表达的影响1,25(OH)2D3组上清液中TGF-β1浓度显著低于高糖组(P<0.01)。10-6mol/L的这种抑制作用最明显(P<0.01)。结论1、RPMCs存在VDR的表达。2、LPS和高糖可以从基因和蛋白水平以浓度和时间依赖方式下调体外培养的RPMCs的VDR表达,同时以浓度和时间依赖方式刺激炎症因子的表达。3、1,25(OH)2D3可以从基因和蛋白水平拮抗LPS及高糖对VDR的表达下调作用,同时抑制炎症因子的产生。4、VDR与TNFαTGF-p1表达负相关,1,25(OH)2D3对腹膜透析相关腹膜炎具有一定的保护作用。