人肌果糖1,6-二磷酸酯酶结构与功能的研究

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克隆和高效表达了人肌果糖1,6-二磷酸酯酶.为了纯化方便,将人肌酶cDNA克隆至表达载体pET15中,即在N端引入了Hig<,6>Tag.比较重组人肌酶与蛇肌酶及His<,6>Tag人肌酶的酶学性质.引入His<,6>Tag以后,基本酶学性质不改变,介在中性pH下,抑制His<,6>Tag人肌酶活力50﹪时所需要的AMP浓度大大增加(是野生型的4126倍),同时AMP结合的负协同性消失.His<,6>Tag的人肌酶被枯草杆菌蛋白酶作用在loop区限制性蛋白水解的速度明显地变慢,此外,CD结果还表明,His<,6>Tag的人肌酶的α螺旋含量增加,这些结构的改变,可能也影响人肌酶亚基之间相互作用.因此导致AMP抑制的协同性减弱和AMP抑制脱敏.引入的His<,6>Tag对随后的人肌酶二级结构的形成及调节功能均有影响,这些结果为新生肽链的折叠提供有用信息.
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