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随着现代生活节奏和压力不断变大,人们可能伴随着不同程度的疲劳症状,长期处于精神和体力疲劳状态,危害人体免疫功能等,进而导致各类疾病的发生发展。随着人们对以疲劳为代表的亚健康状态关注度不断提升,从天然来源动植物和微生物中探索安全有效的抗疲劳活性成分和产品,已成为目前科学研究和产业开发的热点。玛咖属于十字花科类草本植物（温、甘、平,归肺、肾经）,含有丰富的营养成分和次级代谢产物,已知的生物活性包括:提高性功能、缓解体力疲劳和作为脂肪酸水解酶抑制剂等,然而很多生物功效的物质基础还不清楚。玛咖酰胺类单体化合物作为玛咖中特有的次级代谢产物,被广泛认为是玛咖生物活性的功能成分之一,然而受限于玛咖中酰胺类化合物含量低、种类多,且单体间结构和性质相似等因素,玛咖酰胺单体获取困难。因此,目前与玛咖相关的研究集中于玛咖酰胺单体化合物的发现和定性定量分析、玛咖及其提取物的药理药效研究,产品开发也大都集中于玛咖粗加工和粗提物应用领域。为了更深入研究玛咖的生物活性物质基础和功效,我们认为,玛咖酰胺的更高效提取和规模化制备是玛咖深层次研究和开发的必经之路。本课题拟从天然玛咖酰胺提取和化学合成的角度分别出发,开发玛咖酰胺单体化合物的制备和合成工艺,为玛咖中特征成分的药理药效评价提供物质基础;考察所制备玛咖酰胺的抗疲劳作用,以期为玛咖产品深层次开发提供新思路和参考。研究目的:设计从玛咖中提取玛咖酰胺类单体化合物最优的实验工艺,并探索富集玛咖酰胺新方法;设计玛咖中主要玛咖酰胺类单体的合成和纯化工艺,并探索大量合成高纯度玛咖酰胺的新思路;体内评价N-苄基十六碳酰胺对小鼠体力疲劳作用效果及其相关指标变化。研究方法:采用超声提取玛咖粉的方法富集玛咖酰胺,首次提出了酸碱反应减少主要杂质（脂肪酸类）,并通过正交实验,在料液比、超声时间、溶剂类型、氢氧化钠添加量和反应时间等方面,优化提取工艺。进一步探索玛咖中主要玛咖酰胺的合成工艺,结合前人酰胺键合成的经验,采用最传统酰胺键合成方法即碳二亚胺缩合法,利用不同的脂肪酸包括亚麻酸,亚油酸和硬脂酸等,由碳二亚胺类缩合剂活化脂肪酸中的羧基,再和苄胺或间甲氧基苄胺结合,生成玛咖酰胺类化合物。反应过程中加入酰胺键的催化剂和缚酸剂,加快合成反应的速率;对合成产物采用酸碱反应、重结晶和硅胶柱等纯化方法,得到大量高纯度的玛咖酰胺,通过一系列的检测方法包括1H和13C NMR,MS-ESI,IR和HPLC-DAD,证明合成的单体就是玛咖酰胺类化合物。为了进一步确定玛咖酰胺是玛咖药效的物质基础,选择N-苄基十六碳酰胺单体属于玛咖酰胺类化合物,评价其缓解小鼠体力疲劳效果,并在四个不同的时间点观察小鼠体重和负重游泳时间的变化;体内指标采用试剂盒法检测小鼠肝糖元、尿素氮、乳酸脱氢酶、血胺和血乳酸含量的变化,简单探讨玛咖酰胺缓解体力疲劳的功效。研究结果:1.玛咖中主要酰胺类化合物的提取工艺优化研究通过正交实验,优化实验工艺,得出在最优条件如下:以乙醚为提取溶剂,料液比1:30（g/m L）,超声时间30 min;酸碱反应的最佳条件为:氢氧化钠添加量1:5（g/m L）,反应温度50℃和酸碱反应时间50 min。提取物UV色谱图显示,其中主要含有五种玛咖酰胺单体化合物,这里将五种酰胺类单体总含量计算成玛咖中玛咖酰胺类化合物的总含量,在这样的条件下,提取物中的玛咖酰胺含量为20.79%,相对于DBS 53/001—2015《食品安全地方标准玛咖干制品》中的提取方法,它的相对含量上升了73.9%。2.合成玛咖中主要的五种玛咖酰胺类单体化合物利用1H和13C NMR,MS-ESI,IR和HPLC-DAD等方法检测最终产物,结果表明:合成的单体化合物就是玛咖中五种主要的单体化合物即间甲氧基-苄基-亚麻酰胺,苄基-亚麻酰胺,间甲氧基-苄基-亚油酰胺,苄基-亚油酰胺和苄基-十六烷酰胺,且它们的大概纯度分别为97.63%,95.71%,96.21%,95.13%和95.92%。3.评价N-苄基十六碳酰胺缓解小鼠体力疲劳能力C57小鼠每天被灌胃N-苄基十六碳酰胺单体,持续30天,在不同的时间点检测小鼠的体重和负重游泳时间变化,最后严格按照不同试剂盒中标准方法,检测小鼠血清中指标和肝脏中糖原含量,结果表明:实验组小鼠（灌胃玛咖酰胺类单体）与空白组相比,小鼠体重变化没有显著性差异,而实验组中小鼠的负重游泳时间和肝糖原含量,都显著高于空白组;空白组小鼠其他血清中的指标如血乳酸、乳酸脱氢酶、血胺和尿素氮含量等,均显著性高于实验组。结果表明,N-苄基十六碳酰胺单体作为玛咖中特有的次级代谢产物,是缓解小鼠体力疲劳的功效成分之一。结论:玛咖中酰胺类单体化合物是极性最弱的酰胺类生物碱之一,利用其特殊的理化性质,采用乙醚作为玛咖酰胺最佳的超声提取溶剂,极大的富集玛咖中五种主要的单体化合物,同时采用酸碱反应方法,显著的减少脂肪酸类等杂质,纯化玛咖酰胺类单体;在探索提取工艺过程中,提出了碳二亚胺类缩合法,是玛咖酰胺合成的有效途径,既通过酸碱反应和重结晶等方法纯化玛咖酰胺单体化合物,得到大量高纯度的玛咖酰胺类单体。药理实验表明,其中N-苄基-十六碳酰胺作为结构最简单的玛咖酰胺类单体化合物,可有效提高肝糖元和减少血乳酸含量等,是玛咖功效的物质基础之一,具有广阔的市场前期。