辣椒疫霉对氟吡菌胺的抗药性风险研究

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辣椒疫病是由辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)引起的一种毁灭性的土传病害,该病原抗逆性强、生存力强,严重威胁着世界各辣椒产区的种植和产量。目前生产上的治理策略主要以化学防治为主,但由于内吸性杀菌剂的大量使用,辣椒疫霉的抗药性问题日益突出。氟吡菌胺是一种新型结构的苯甲酰胺类杀菌剂,对常见卵菌引起的病害具有良好防效,尚未大面积推广使用。为探明辣椒疫霉对氟吡菌胺的抗药性风险,本研究主要从辣椒疫霉对氟吡菌胺的敏感基线、抗药性风险评价、抗药突变体产生抗药性的机制、抗药突变体的表型等方面进行系统深入的研究和探讨,主要结果如下:1.辣椒疫霉对氟吡菌胺的敏感基线。采用菌丝生长速率法测定了重庆市6个主要辣椒种植区县的110个辣椒疫霉菌株对氟吡菌胺的敏感性。结果表明,氟吡菌胺对110株辣椒疫霉菌株均具有良好的抑制效果,平均EC50值为0.3222±0.1080μg/mL。不同地区菌株间EC50值差异较小,其中最大为0.5719μg/mL,最小为0.1028μg/mL,相差5.6倍。辣椒疫霉对氟吡菌胺的敏感性频率分布呈连续单峰曲线,接近正态分布,因此可作为敏感基线用于田间监测辣椒疫霉病菌对氟吡菌胺的敏感性。2.通过紫外诱导获得3株辣椒疫霉抗氟吡菌胺突变体,突变频率为0.86%,抗性水平分别为69.5、98.5、94.2倍。根据FAO对抗性划分标准并结合敏感基线及抗药突变体的抗性水平,本试验共获得3株中抗辣椒疫霉突变体。其中部分抗药突变体的生物学性状在菌丝生长、温度适应能力、致病力、产孢子囊能力方面与亲本菌株无显著性差异,部分抗性菌株则显著低于亲本菌株,但仍有致病力和产孢子囊能力,且3个抗药突变体均能稳定遗传。交互抗性测定结果表明,氟吡菌胺与甲霜灵、霜脲氰、烯酰吗啉、丁吡吗啉、嘧菌酯之间不存在交互抗性。综合以上结果分析表明,辣椒疫霉菌对氟吡菌胺具有一定的抗性风险。因此,氟吡菌胺的连续使用有利于抗药性群体的发展,生产上使用时应与无交互抗性的药剂混合或交替使用。3.抗氟吡菌胺突变体及其亲本菌株的生理生化机制。结果表明:抗药突变体和其亲本菌株对高、中、低渗透压均表现敏感,且抗药突变体的渗透压调节能力要大于亲本菌株。在葡萄糖浓度法和氯化钠浓度法的渗透压环境下,抗药突变体对渗透压表现出不同的调节方式,葡萄糖能作为营养物质供给病原菌,而NaCl则不能作为营养物质被利用。所有的菌株细胞膜通透性在低浓度时能够渗漏出较多的电解质,抗药突变体的电导率在一定范围内明显高于亲本菌株,在较高浓度下则低于亲本菌株。随着氟吡菌胺处理时间的延长,抗药突变体和亲本菌株的β-1,3葡聚糖酶的活力均呈下降趋势,且抗药突变体的β-1,3葡聚糖合成酶的活力低于亲本菌株。不同的抗药突变体与亲本菌株的蛋白质含量不成规律性。4.采用Biolog表型芯片技术,测定了辣椒疫霉抗氟吡菌胺突变体及其亲本菌株对PM1-3微孔板的碳氮源物质利用情况和对PM21-22微孔板中化学物质的敏感性。结果表明:抗药突变体和亲本菌株均能利用PM1、PM2中的190种碳源物质,所有的菌株对PM1中95种碳源物质的利用能力要大于PM2中的物质,且抗药性突变体对碳源的利用能力与亲本菌株相当,并未出现较大差异。抗药突变体BS11-5-1对PM3中95种氮源物质的利用与其亲本菌株相当,且均能达到较大的利用效率,而抗药突变体JLP11-4-2、JLP11-4-3及其亲本菌株对PM3中氮源物质的利用均较低。对化学物质的敏感性测定结果表明:抗药突变体与亲本菌株对PM21-PM22中化学物质的敏感性存在一定差异,抗药突变体表现出对化学物质更加敏感。表明可以根据化学敏感物质的敏感性,为辣椒疫霉新型杀菌剂的生产和防治策略提供理论依据。
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