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胰腺癌(PC)是恶性程度极高的人类恶性肿瘤之一,位居癌症致死人数排名的第四位。姜黄素(二糠基甲烷)是来源于姜黄类植物的疏水性多元酚。许多研究已经证明姜黄素在多种人类肿瘤细胞,包括胰腺癌细胞中发挥其抗肿瘤功能。同时,姜黄素能够通过调控多种重要的癌症信号分子通路,从而发挥抗肿瘤作用。然而,姜黄素抗癌的详细分子机制还没有彻底阐明。YAP(Yes相关蛋白)及其闭合旁系同源物TAZ(具有PDZ结合基序的转录共激活因子)是Hippo信号通路中的两个转录共激活因子,在多种肿瘤细胞中发挥着原癌基因的作用。因此,本研究的目的是探索姜黄素抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭能力是否通过调控YAP/TAZ的途径。【研究方法】1、通过CTG方法和细胞集落生成实验探索姜黄素处理后的胰腺癌细胞增殖情况。2、通过流式细胞仪和倒置荧光显微镜检测在姜黄素的作用下胰腺癌细胞的凋亡和细胞周期阻滞情况。3、通过伤口愈合实验和Transwell侵袭实验检测胰腺癌细胞在姜黄素处理后细胞迁移和侵袭能力的改变。4、通过蛋白免疫印迹法检测姜黄素处理后的胰腺癌细胞中YAP、TAZ及其下游蛋白Notch1蛋白表达量的变化情况。5、通过转染YAP/TAZ质粒或小干扰RNA(si RNA),改变胰腺癌细胞内YAP/TAZ的表达量,进而确定姜黄素抑制胰腺癌细胞发生发展是否通过YAP/TAZ的途径。【研究结果】1.姜黄素能够抑制胰腺癌细胞的增殖和存活。2.姜黄素能够诱导胰腺癌细胞的凋亡,并且将细胞阻滞在G2/M期。3.姜黄素抑制了胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力,同时抑制了癌基因YAP/TAZ的蛋白表达量。4.在胰腺癌细胞中,过表达YAP能够诱导细胞的增殖,减弱细胞的凋亡,同时能够促进细胞的侵袭能力。5.过表达YAP能够促进胰腺癌细胞的迁移能力,同时增强YAP的下游基因Notch1的蛋白表达量。6.过表达YAP降低了姜黄素抗胰腺癌的作用。7.在胰腺癌细胞中,降低YAP的蛋白表达量能够抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,并且抑制了细胞的侵袭能力。8.降低YAP的蛋白表达能够抑制胰腺癌细胞的迁移能力,同时降低YAP的下游基因Notch1的蛋白表达。9.降低YAP促进了姜黄素抗胰腺癌的作用。【结论】在实验中我们发现姜黄素能够明显抑制胰腺癌细胞的生长,削弱克隆形成能力,抑制细胞迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡和阻滞细胞周期。我们进一步发现过表达YAP基因能够增强胰腺癌细胞的增殖能力并且能够减弱姜黄素对胰腺癌细胞的抗癌作用。除此之外,我们发现姜黄素能够明显下调基因YAP和TAZ的蛋白表达,随后抑制它们的下游基因Notch-1的表达。总之,我们的实验结果说明姜黄素对YAP和TAZ基因活性的药理学抑制可能会成为一个有希望的抗胰腺癌的治疗策略。