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目的:克隆人IL-2Rγ胞外区基因，构建真核表达载体pPIC9K-hsIL-2Rγ和pcDNA3.1-hsIL-2Rγ，并分别在毕赤酵母GS115和哺乳动物细胞COS-7中进行表达和鉴定，为研制针对hIL-2Rγ胞外区不同表位的单克隆抗体或基因工程抗体等奠定基础。
方法:(1)分离正常人外周血单个核细胞(PBMC)，加PHA和IL-2诱导培养，促进IL-2Rγ链基因转录，提取总RNA，分别设计两对引物，采用RT-PCR法克隆IL-2Rγ胞外区基因；(2)EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ分别双酶切RT-PCR产物和pPIC9K质粒，回收后用T4 DNA连接酶连接得到重组质粒pPIC9K-hslL-2R7；Xho Ⅰ和HindⅢ分别双酶切RT-PCR产物和pcDNA3.1<'(-)>质粒，回收后用T4DNA连接酶连接得到重组质粒pcDNA3.1-hsIL-2Rγ(3)分别转化Ecoli DH5 α，用Amp平板筛选阳性克隆，提取重组质粒进行酶切、PCR和测序鉴定。(4)抽提pPIC9K-hsIL-2R7重组质粒， Sac Ⅰ酶线性化，聚乙二醇法转入感受态GS115菌株中，MD平板筛选His<'+>转化子，经G418筛选高拷贝酵母菌株，并做菌落PCR鉴定，然后挑取高拷贝菌株，在BMGY培养基中进行数量积累，用BMMY培养基进行诱导表达；重组质粒pcDNA3.1-hsIL-2Rγ经中量抽提后采用FuGENE<'6>脂质体法转化COS-7细胞。(5)进行重组蛋白的免疫酶染色、SDS-PAGE及Western Blot鉴定。
结果:(1)hIL-2Rγ胞外区基因的RT-PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，结果均显示为单一条带，大小分别为738bp和830bp。经双酶切鉴定、PCR鉴定，结果显示两种重组质粒，即pPIC9K-hslL-2Rγ和pcDNA3.1-hsIL2Rγ构建成功，公司测序结果也证实与文献报道的hIL-2Rγ胞外区基因序列一致。(2)免疫酶染色、SDS-PAGE及WeaemBlot等鉴定结果显示，两种重组质粒已分别成功转化GS115和COS-7细胞，并获得诱导表达的hsIL-2Rγ重组目的蛋白。
结论:(1)成功构建了人IL-2Rγ胞外区真核表达载体pPIC9K-hsIL-2Rγ和peDNA3.1-hslL-2Rγ，并在毕赤酵母GS115和哺乳动物细胞COS-7中成功表达。(2)酵母表达的重组人IL-2Rγ胞外区蛋白条带有上移现象，分子量较大，可能其糖基化过度或存在二聚体；而哺乳动物细胞COS-7表达的重组蛋白分子量约35KD，提示其糖基化或折叠正确，可能更适合用于研制针对人IL-2Rγ胞外区不同功能表位的单抗或基因工程抗体。