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目的:
本课题的主要目的是研究在不同大小的机械牵张力作用下,小鼠成骨细胞MC3T3-E1BMP-2表达的情况,从而了解其对成骨活动的影响,为更进一步理解正畸牙齿移动提供依据。
正畸牙齿的移动是牙齿在外力作用下,牙槽骨的不断形成和吸收,并伴随着牙周膜的适应性改建。牙槽骨是人体骨骼中最活跃的部分,它的可塑性很大、适应性很强,根据外部条件的变化不断进行骨的改建,牙槽骨的这一生理特性也正是正畸牙齿移动的生物学基础。牙槽骨形成的首要步骤是间充质细胞聚集和分化为成骨细胞,然后再形成骨的过程。目前,国内对于以牵张力作为诱导因素研究成骨细胞骨形成过程受到的影响有较多的报道,而对间充质细胞聚集和分化为成骨细胞的过程却研究甚少。间充质细胞的聚集和分化主要是由骨形成蛋白(BMP)调控的,骨形成蛋白是唯一能够单独诱导间充质细胞向骨组织方向分化的生长因子,是骨组织形成过程中最关键的调节因子之一,骨形成蛋白中除BMP1外其余都是转化生长因子β(TGF-β)超家族的成员,其中具有较强功能活性者为BMP-2、BMP-4和BMP-7。
本实验拟通过弹力膜六孔板培养皿及细胞加载装置,模拟正畸牙齿移动过程中的施力方式,在体外加载MC3T3-E1细胞(成骨样细胞),通过RT-PCR及ELISA定性定量测定机械牵张力对细胞BMP2表达的影响。
方法:
1、细胞培养:小鼠成骨样细胞MC3T3-E培养,传代,进行试验。
2、细胞分组,加力:本实验将同步化生长的细胞随机分为A、B、C、D四组。A组为对照组(0%拉伸形变率),即非加力组,B组取6%拉伸形变率,C组取12%拉伸形变率,D组取18%拉伸形变率。
3、加力24h后收集细胞,采用实时荧光定量PCR检测BMP-2的mRNA表达,纪录结果。
4、加力72h后收集细胞,采用ELISA方法检测BMP-2蛋白的表达,记录结果。
5、用spss12.0统计学分析软件,数据采用t检验法进行统计分析。
结果:
1、MC3T3-E1电镜观察结果:加力前MC3T3-E1细胞呈多边形、多角形,细胞排列无规律。加力后,细胞形态结构和排列方式发生了明显的改变,细胞呈长梭形,排列更加有序,呈方向性,与加载牵张力的方向相一致。
2、实时定量PCR结果:未加力组BMP-2的mRNA表达量较低,6%拉伸形变组、12%拉伸形变组及18%拉伸形变组的BMP-2表达量分别是未加力组的2.31倍、4.99倍及3.58倍,其中12%拉伸形变组的表达量最高。
3、ELISA结果:在不施加力学刺激的情况下,对照组细胞少量表达BMP-2蛋白,加力组BMP-2的表达量比对照组明显增加,并且有显著性差异(P<0.01),各加力组之间BMP-2的表达量也有显著差异(P<0.01)。随着牵张力的增大,BMP-2的表达也增加,至12%拉伸形变时表达量最高,但随着牵张力的继续增大(18%拉伸性形变),BMP2的表达反而下降。
结论:
机械牵张力可以引起成骨细胞MC3T3-E1细胞形态的改变,并明显促进骨形成蛋白(BMP2)mRNA的表达及蛋白表达,其中12%的弹性形变对BMP2基因和蛋白表达的影响最大。