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在本研究中,我们发现小分子化合物TGI1002能够对迟发型变态反应有关的炎症反应模型——小鼠接触性皮炎模型产生明显的治疗作用,并进一步探讨了其发挥免疫抑制作用的可能机制,证明了小分子化合物TGI1002具有成为新的免疫抑制药物的潜在可能性。本研究的第一章中,我们利用picryl chloride所致的小鼠接触性皮炎作为动物模型,评价了小分子化合物TGI1002的治疗效果。结果显示灌胃给予TGI1002可以剂量依赖性地抑制小鼠耳肿胀反应。同时,TGI1002可显著改善接触性皮炎相关的病理变化。在小鼠接触性皮炎模型中,IFN-γ,IL-2和TNF-a是主要的致炎因子。近几年研究发现Th17细胞的特征性细胞因子IL-17A也参与了该炎症反应。因此我们用Q-PCR的方法检测小鼠淋巴结中IFN-γ、IL-2、TNF-α和IL-17A四种细胞因子的表达。结果发现TGI1002可以下调IFN-γ、IL-2、TNF-a的表达,而对IL-17A影响不大,提示TGI1002对Th17细胞影响较小。此外,我们还考察了TGI1002对二甲苯诱导的小鼠耳肿胀模型的治疗效果,发现各剂量的TGI1002均不能有效地抑制二甲苯诱导的小鼠耳肿胀。由此推测,TGI1002对小鼠耳肿胀模型的治疗作用可能与抑制炎症介质如组胺等释放无关。在第二章中我们进一步探讨了TGI1002发挥免疫抑制作用可能的机制。考虑到接触性皮炎是T细胞依赖性的反应,所以我们使用被动转移实验证明了T细胞是TGI1002的主要作用细胞,并且TGI1002可抑制TNBS刺激的致敏淋巴结细胞的增殖,以上结果提示TGI1002是通过抑制T细胞的活化和增殖来发挥效应的。与此同时,TGI1002可显著抑制Con A或者anti-CD3/anti-CD28诱导的T淋巴细胞的活化增殖。通过流式细胞术检测发现TGI1002可有效减少T细胞表面活化标志物CD25和CD69的表达,抑制T淋巴细胞的活化。TGI1002可将T淋巴细胞细胞周期阻断在G0/G1期,并促进T淋巴细胞的凋亡。可以认为TGI1002抑制T淋巴细胞的活化,将T细胞的细胞周期阻断在G0/G1期,相应的造成体外培养的T淋巴细胞凋亡,数量减少。T细胞发挥功能时,细胞因子是一项及其重要的指标。体外实验结果和第一章中的结果一致,TGI1002可有效抑制T淋巴细胞中炎症因子IL-2,IFN-y,和TNF-α的分泌,而对IL-17A影响不大。TGI1002是通过什么样的机制抑制这些细胞因子表达还需要进一步研究。众所周知,IFN-y-STAT1-T-bet形成一个正向调节回路,对稳定Th1细胞表型起着关键作用。通过免疫印迹分析发现TGI1002可以剂量依赖性的抑制活化T细胞中T-bet的表达。同时,TGI1002也可以剂量依赖性的抑制STAT1的磷酸化。那么TGI1002是怎样抑制STAT1的磷酸化的呢?我们发现TGI1002可以剂量依赖性的上调SHP2的磷酸化水平。因此,猜测TGI1002可能通过上调SHP2磷酸化水平,竞争性的抑制STAT1的磷酸化,从而抑制IFN-γ/STAT1通路。综上所述,TGI1002对小鼠接触性皮炎模型的治疗作用是通过影响T细胞的活化增殖以及T细胞的功能来实现的。TGI1002可能通过上调T细胞中SHP2的磷酸化水平,竞争性抑制IFN-γ/STAT1通路中STAT1的磷酸化,进而下调T-bet的表达,抑制TNF-α、IFN-γ和IL-2等炎症因子的分泌。在此基础上,TGI1002抑制T细胞的活化,T细胞被阻断在G0/G1期,不能再继续分裂增殖作为效应细胞参与到炎症反应中去。