东方泰勒虫(Theileria Oriental)是一种经蜱传播的胞内原生动物寄生虫,在世界范围内广泛分布。该病原体能够引发牛东方泰勒虫病,其主要临床表现为发热、溶血性贫血、生产力下降、乳牛和肉牛的流产或死亡,给养牛业造成了经济损失和危害。目前,血液直接PCR检测方法因其不需要提取DNA而直接应用血液,从而节约时间减少成本故逐渐发展并应用于动物疾病流行病学研究。因此本试验直接以患东方泰勒虫病的牛血液为模板,建立了血液直接PCR检测方法。本文首先根据Genbank上发布的东方泰勒虫p33基因序列[DQ078264.1]设计一对特异性引物,并以血液为模版,采用血液直接PCR反应体系扩增出一条416 bp大小的条带,通过测序得到的核酸序列与基因文库中发表的p33基因进行序列比对同源性高达99%,进而确定该目的片段为p33基因。此外,本试验设计的引物均未能对弓形虫、新孢子虫、牛附红细胞体扩增出目的条带,说明该方法具有良好的特异性。同时,该方法能检测出1μL血液最大稀释倍数为40倍。说明该方法具有良好的敏感性。另外,分别对5份同一批的东方泰勒虫阳性血液样品进行血液直接PCR检测以及常规PCR检测并重复3次试验结果一致说明该方法重复性良好。采集吉林省多个县市共210份疑似牛东方泰勒虫抗凝血进行血液直接PCR检测,与常规PCR法进行比较,确定该方法在诊断检测方面的优势。结果显示,直接PCR总阳性率为30.0%,而常规PCR总阳性率为25.7%,两种方法的符合率为94.0%,一致性分析Kappa值为0.85。阳性符合率为80.0%,阴性符合率为92.0%;通化地区阳性率最高,为75.0%,而洮南地区阳性率最低,为12.0%,不同地区阳性率之间存在统计学差异(P<0.05)。该检测结果与胡诗悦等报道的吉林省的牛东方泰勒虫感染率为21.1%～75.9%结果相符。结果表明该方法更值得推广和应用。本试验建立一种简便、快捷、敏感、特异的东方泰勒虫快速检测方法,可适用于东方泰勒虫病的诊断和流行病调查。