聚乙烯二氨三嗪基氢键型基因转染系统的细胞内化研究

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基于乙烯基二氨三嗪单体(VDT)和质粒DNA(pDNA)的腺嘌呤-胸腺嘧啶碱基对间氢键的相互作用,我们实验室前期成功构建了PVDT基新型氢键型非病毒转基因载体。在前期实验的基础上,本论文中,我们进一步考察PVDT基聚合物/pDNA复合物性质,琼脂糖凝胶电泳验证了载体与pDNA复合的氢键型特征。复合物的表面电荷和复合物粒径测量显示PVDT基聚合物可以覆盖pDNA的表面电荷,形成略带负电或电中性的复合物;也发现随着复合比增加,复合物粒径先减小再增大,这是由于两个因素造成的:更多的PVDT基聚合物能够压缩pDNA到更加紧密的状态,中性的复合物粒子不稳定容易相互聚集。在细胞内化摄入的研究中,chlorpromazine和filipin III能够分别抑制网格蛋白控制的内吞作用和细胞膜穴样内陷控制的内吞作用。两种抑制剂的抑制结果表明,PVDT基聚合物采用一种非网格蛋白、非细胞膜穴样内陷控制的内吞方式被COS-1细胞内化吸收。对这种内吞方式进行温度抑制实验和动力学实验进行进一步考察发现:1)它是一种高度能量依赖的过程,2)它是一种更加缓慢的实现有效转染的内化途径。
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