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背景与目的:一氧化氮(NO)在心血管系统疾病的发生发展过程中发挥了关键的作用,成为近年来实验工作者研究的热点。本课题在建立大鼠动脉粥样硬化模型基础上,模拟心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的变化,应用辛伐他汀(Simvastatin)进行干预,探讨动脉粥样硬化心肌缺血/再灌注时,辛伐他汀对一氧化氮的效应及eNOS(内皮型一氧化氮合酶)和iNOS(诱导型一氧化氮合酶)在冠状血管内皮表达的影响。 材料与方法:健康成年雄性Wistar大鼠100只,随机分5组。 第一组:普通饲料+心肌缺血/再灌注组(普通饮食组,n=20);第二组:高胆固醇饲料+心肌缺血/再灌注组(高脂血症组,n=20);第三组:高胆固醇饲料+辛伐他汀+心肌缺血/再灌注组(辛伐他汀组,n=20),第四周开始给予辛伐他汀5mg/kg.d;第四组:高胆固醇饲料+辛伐他汀+N-甲基亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)+心肌缺血/再灌注组(L-NAME组,n=20),第四周开始同时给予二药辛伐他汀和N-甲基亚硝基左旋精氨酸甲酯,其中L-NAME10mg/kg.d,辛伐他汀5mg/kg.d;第五组:高胆固醇饲料+假手术组(sham组,n=20)。 第一组给予普通鼠饲料,其余四组给予高胆固醇饲料(含3%-4%胆固醇,15%-20%猪油,10%蛋黄,0.5%胆盐,0.2%丙基硫氧嘧啶,其余为基础饲料),饮水不限。各组均喂养8周。前四组均为心肌缺血/再灌注损伤组。开胸,结扎左冠状动脉,时间分别为缺血30分钟,再灌注5分钟、再灌注20分钟、再灌注120分钟。第五组为假手术组。 实验检测的指标包括:心率、血清一氧化氮、血清胆固醇水平、冠状血管内皮上内皮型一氧化氮合酶(iNOS)和诱导型一氧化氮合酶(eNOS)的表达水平。 记录实验各时段心率(HR)的变化,并且分别于缺血前、缺血30分钟、再灌注 5分钟、再灌注 20分钟、再灌注 120分钟时,快速取颈静脉血检测一氧化氮,测血清胆固醇水平,比较喂养前后胆固醇水平的变化。免疫组织化学high七ABC法分别检测内皮型一氧化氮合酶(iNOS讨诱导型一氧化氮合酶*NOS)在冠状血管内皮上的表达。电镜观察胆固醇对胸主动脉内皮细胞(EC)结构的影响。 结果显示:辛伐他订和 N一甲基亚硝基左旋精安酸甲酯(L-NAME)合用心率减少;高胆固醇饮食大鼠的血清胆固醇水平明显高于普通饮食组,辛伐他汀组血清胆固醇低于高脂血症组,说明辛伐他汀具有降低胆固醇的作用。缺血30分钟,高脂血症组大鼠血.清一氧化氮水平及内皮型一氧化氮合酶、诱导型一氧化氮合酶表达显著减少。高胆固醇可以使缺血期诱导型一氧化氮合酶、内皮型一氧化氮合酶水平下调。再灌注5分钟,高脂血症组冠状血管内皮表达诱导型一氧化氮合酶有所增加;再灌注20分钟,高脂血症组冠状血管内皮诱导型一氧化氮合酶比缺血期表达明显增多,辛伐他汀组诱导型一氧化氮合酶和内皮型一氧化氮合酶表达下降;再灌注 120分钟,辛代他汀组一氧化氮水平及诱导型一氧化氮合酶。内皮型一氧化氮合酶表达较高脂血症组增加,各时相点L-NAME组均可部分阻断辛伐他汀对一氧化氮、内皮型一氧化氮合酶、诱导型一氧化氮合酶的效应。说明动脉粥样硬化再灌注早期,辛伐他汀可逆转胆固醇诱导的一氧化氮及其合酶的改变,明显下调诱导型一氧化氮合酶的表达,再灌注晚期一氧化氮及其合酶的浓度均显著升高。一氧化氮的合成与释放在辛伐他汀桔抗动脉粥样硬化及心肌缺血./再灌注中发挥了关键的作用。