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目的:本实验通过观察丹贝益肺方对人胚肺成纤维细胞增殖的抑制,观察统计不同浓度丹贝益肺方溶液对人胚肺成纤维细胞胶原蛋白表达的影响,研究其是否对人胚成纤维细胞有抑制和干预的作用,来证明丹贝益肺方对肺纤维化的作用,为丹贝益肺方治疗肺纤维化提供实验基础。方法:1.体外培养人胚肺成纤维细胞,用不同浓度丹贝益肺方进行处理,分为（1）空白对照组、（2）丹贝益肺方1×10-3 mg/ml组、（3）丹贝益肺方1×10-2 mg/ml组、（4）丹贝益肺方1×10-1 mg/ml组、（5）丹贝益肺方1 mg/ml,在温度为37℃,浓度为5%的培养箱中,培养的时间分别为:24 h、48 h以及72 h。在显微镜镜下观察并记录细胞的不同形态变化,然后应用MTT法,对不同浓度丹贝益肺方作用不同时间进行记录和检测,以及肺成纤维细胞在双波长（490 nm,630 nm）的吸光度A值。通过记录并对比A值做时效、量效图表,最终对得到的不同浓度以及不同时间丹贝益肺方对肺成纤维细胞增殖的影响进行比较。2.通过体外培养MRC-5细胞,并将培养的细胞分为四组:（1）空白对照组、（2）地塞米松组(5×10-2 mg/ml)、（3）丹贝益肺方低浓度组(1×10-3 mg/ml)、（4）丹贝益肺方高浓度组(1×10-1 mg/ml)。通过细胞爬片免疫组化法观察细胞内Ⅰ型胶原蛋白（COLⅠ）、Ⅲ型胶原蛋白（COLⅢ）表达的变化,同时采用Image pro-plus图像分析系统,把各组对应COLⅠ、COLⅢ表达的IOD计算出来。3.通过体外培养MRC-5细胞,并将培养的细胞分为四组:（1）空白对照组、（2）地塞米松组(5×10-2mg/ml)、（3）丹贝益肺方低浓度组(1×10-3mg/ml)、（4）丹贝益肺方高浓度组(1×10-1 mg/ml),同时采用实时定量PCR法,对各组人胚肺成纤维细胞内Ⅰ、Ⅲ型胶原m RNA表达的变化进行测定。结果:1.丹贝益肺方各浓度组:（1）1×10-3 mg/ml组、（2）1×10-2 mg/ml组、（3）1×10-1 mg/ml组、（4）1 mg/ml组,通过分层次与MRC-5细胞进行共同孵育在不同的时间分别为:24h、48h、72h后,结果显示:随着将丹贝益肺方的浓度不断增大,与MRC-5共同孵育的时间不断延长,发现细胞增殖抑制率发生明显的变化。在相同的时间下,丹贝益肺方1mg/ml组的细胞增殖抑制率最高;同一浓度下,丹贝益肺方在作用时间为72h时,细胞增殖抑制率也呈最高值;所以可以得出:丹贝益肺方1 mg/ml组细胞增殖抑制率的逐渐升高是随着时间的不断延长而逐渐改变的。2.采用免疫组化法对MRC-5细胞内COLⅠ蛋白、COLⅢ蛋白表达变化情况进行分析,同时应用Image pro-plus图像分析系统,计算出各组COLⅠ蛋白、COLⅢ蛋白表达的IOD,通过统计学分析发现地塞米松组、丹贝益肺方低浓度组(1×10-3 mg/ml)、丹贝益肺方高浓度组(1×10-1 mg/ml)各组MRC-5细胞COLⅠ蛋白、COLⅢ蛋白表达的IOD与空白对照组相应的IOD相比较均有所减少,差异具有统计学意义（P<0.05）;丹贝益肺方高浓度组(1×10-1 mg/ml)与地塞米松组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。3.采用实时定量PCR法,对MRC-5细胞内COLⅠm RNA、COLⅢm RNA的相对表达量进行检测,结果显示:地塞米松组、丹贝益肺方高浓度组、丹贝益肺方低浓度组各组MRC-5细胞内COLⅠm RNA、COLⅢm RNA相对表达量与空白对照组的相对表达量比较均有不同程度的减少,且差别有统计学意义（P<0.05）,丹贝益肺方高浓度组同丹贝益肺方低浓度组、地塞米松组分别比较差别有统计学意义（P<0.05）。结论:1.丹贝益肺方通过抑制人胚肺成纤维细胞MRC-5细胞的增殖情况,使其在肺内的沉积得到减少,起到防治肺纤维化的作用。2.丹贝益肺方具有抗肺纤维化的作用,其机制可能是通过抑制MRC-5细胞COLⅠm RNA、COLⅢm RNA的表达,进而抑制细胞内胶原蛋白的合成与分泌,减少胶原蛋白在肺内沉积,达到防治肺纤维化的目的。