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目的研究槲皮素(Quercetin)对PC12细胞增殖的影响以及防止H2O2氧化损伤PC12细胞的保护效果,同时初步探讨其作用机制。方法通过MTT比色法检测槲皮素对PC12细胞增殖的影响。同时用H2O2诱导PC12细胞建立氧化损伤模型,通过MTT和LDH比色法检测槲皮素对H2O2诱导PC12细胞损伤的细胞存活率的影响,进一步确定槲皮素的保护效果;通过Hoechst-33342染色、PI染色和TUNEL法检测槲皮素防止PC12细胞和海马神经元遭受H2O2损伤在细胞形态上的变化特征和通过流式细胞术(FCM)检测槲皮素对PC12细胞凋亡情况的影响。在槲皮素的保护机制研究中,首先对比检测槲皮素对PC12细胞内ROS水平和MDA的含量,同时检测PC12细胞内抗氧化酶系中SOD、CAT、GSH-PX的活性,讨论槲皮素对遭受氧化应激的PC12细胞内氧化与抗氧化系统之间的平衡的影响;再通过western-blotting免疫印迹法检测槲皮素保护PC12细胞抵抗H2O2氧化损伤时,细胞内Caspase-3、Bcl-2、 Bax和P53等调控细胞凋亡的相关因子的表达情况,从而初步探讨槲皮素发挥保护作用的机制。结果(1)、在一定浓度范围内,检测结果发现槲皮素对PC12细胞没有细胞毒性作用。(2)、经过MTT法和LDH法检测得出槲皮素能够明显的降低H2O2诱导PC12细胞产生的氧化损伤。(3)、通过形态学的研究得出槲皮素能增强PC12细胞对H2O2诱导损伤的承受能力,减少细胞核浓缩和边缘化以及凋亡小体出现等细胞凋亡的表征现象发生,也能减少H2O2所致海马神经元凋亡。(4)、通过对细胞内氧化与抗氧化物的检测得出槲皮素能够提高细胞内SOD、CAT和GSH-PX等抗氧化酶活性,降低细胞内ROS水平,减少MDA产生,削弱H2O2对PC12细胞的氧化损伤。(5)、对PC12细胞内凋亡相关因子表达量的检测发现槲皮素能够抑制酶原型Caspase-3裂解和Bax、p53等凋亡蛋白的表达,且提高Bcl-2抗凋亡蛋白的表达。结论本研究得出,槲皮素对PC12细胞没有毒性,且能够减弱H202诱导PC12细胞和海马神经元发生氧化损伤,改善细胞凋亡表征现象的发生。其可能的机制为:槲皮素通过增加SOD、CAT和GSH-PX等抗氧化酶系,降低因H202诱导产生的ROS,进一步减少胞内脂质过氧化生成MDA;此外,槲皮素发挥保护作用的机制还可能通过抑制细胞凋亡触发因子(如ROS)激活Caspase-3、Bax和p53等促凋亡因子表达,并增强Bcl-2等抗凋亡因子表达,调节细胞凋亡信号通路,发挥保护细胞存活的目的。