呋喃它酮代谢物AMOZ单克隆抗体的制备及免疫学检测方法的研究

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目的:用自制的抗AMOZ单克隆抗体建立检测组织样品中AMOZ残留的间接竞争ELISA和胶体金免疫层析法。方法:AMOZ与对醛基苯甲酸(4-CBA)反应,衍生成半抗原CP-AMOZ,采用活化酯法将CPAMOZ与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)分别偶联制备完全抗原,高效液相色谱质谱法(LC-MS)、SDS-PAGE、紫外光谱扫描鉴定抗原合成效果。通过免疫BALB/c小鼠、杂交瘤制备技术制备抗CPAMOZ的单克隆抗体,并对其效价、亚类、特异性等方面进行鉴定,建立检测组织样品中AMOZ残留的间接竞争ELISA和胶体金免疫层析检测方法。结果:1.成功合成AMOZ的衍生物CPAMOZ及完全抗原CPAMOZ-BSA及CPAMOZ-OVA。2.成功获得稳定分泌抗CPAMOZ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,该细胞株分泌的抗体效价高,属于IgGl类抗体,与CPAMOZ特异性结合,与载体蛋白BSA、OVA及硝基呋喃类代谢物及其衍生物交叉反应均小于1%。3.建立了检测AMOZ的间接竞争ELISA法,ICso为0.86μg/L,最低检测限(LOD)为0.07μg/L,组织样品的样品回收率为81.48%-85.24%;胶体金免疫层析法的最低检测限为5μg/L。结论:1.成功制备了呋喃它酮代谢物AMOZ的完全抗原及单克隆抗体,该抗体灵敏度高,特异性好。2.成功建立了能用于检测组织样品中AMOZ残留的间接竞争ELISA法和快速、灵敏、稳定的胶体金免疫层析法。
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