牙鲆弹状病毒的鉴定和检测方法研究及应用

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日本和韩国是我国水生动物及其产品的主要进口国,我国非常重视对日韩的水生动物及其产品的出口贸易。2004年,根据国家质检总局与韩国海洋水产部签订的《中韩进出口活水生动物检验检疫协议》,在进出境的养殖和种苗用水生动物中,对于鲈鱼、真鲷、鲤鱼、鲫鱼、大菱鲆、牙鲆等要进行牙鲆弹状病毒(Hirame Rhabdovirus,HRV)、真鲷虹彩病毒(Red sea bream iridovirus,RSIV)、淋巴囊肿病毒(Lymphocystis disease virus,LCDV)和黄尾鰤腹水病毒(Yellow tail ascite virus, YAV)等多种疫病的检测。2008年,我们从山东荣成某鱼苗场的石鲽(Kareius bisoloratus)中检测到了牙鲆弹状病毒(HRV),并通过EPC和FHM细胞系分离到病原。为了对该病原进行深入的研究,满足《中韩进出口活水生动物检验检疫协议》的要求,有效地防范国外水生动物病原传入传出我国,保护和促进我国对外贸易的发展,我们开展了对牙鲆弹状病毒病原学和基因组学的研究,这对于认识水生动物病毒的基因组结构与功能,研究水生病毒与宿主的相互作用、阐释疫病的发病机理,了解该病毒与其他鱼类弹状病毒的关系等方面有着重要的理论意义;并在此基础上,建立了几种牙鲆弹状病毒(HRV)的快速检测方法。建立常规RT-PCR、实时定量RT-PCR和LAMP等分子生物学方法;制备HRV的单克隆抗体,建立HRV的ELISA等免疫学检测方法,为快速诊断提供技术支持。建立的快速检测方法可应用于检验检疫行业和水产养殖业,做到对病毒的快速诊断,同时为有关部门制定HRV检疫操作规范的行业标准和国家标准提供理论依据。本研究对于促进我国水生动物对外贸易的发展,保护我国水产养殖业的可持续健康发展,具有重要的现实意义。
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