背景:疟疾是全球危害最为严重的三大传染病之一。抗疟药物抗药性以及蚊虫耐药性的出现使疟疾疫苗的研制工作变得更为迫切。疟原虫红细胞内期是诱发疟疾临床症状的关键时期。红内期疟疾疫苗可分为亚单位疫苗和全虫疫苗,其目的是抑制红细胞内疟原虫的增殖,从而起到控制症状和预防发病的作用。尽管多种红内期亚单位疫苗已经进入临床测试阶段,但由于疗效有限、保护性持久性较差和难以对抗高度的抗原多态性等问题,结果总体不令人满意。因此,疟疾红内期全虫疫苗因其含大量抗原且可产生多抗原保护性等优点而受到重视。相关研究表明,疟疾红内期感染后控制疫苗（Infection treatment vaccine,ITV）可对同种疟原虫感染红细胞的攻击产生完全保护作用,但其保护性难以长期维持。因此,对疟疾疫苗长效保护性机制的研究对有效疟疾疫苗的设计将起到重要的作用。记忆B细胞（MBC）在维持疟疾红内期疫苗长效保护性中起着重要作用。有关研究表明,利用ITV的免疫方式将红内期疟原虫控制在极低的水平反而比出现疟原虫感染后再用药物控制的方式所介导的免疫保护性更强。这表明较低的剂量免疫可能会产生更好的保护效果。此外,B10细胞可释放白细胞介素10（IL-10）防止自身免疫反应和抑制过度炎症。因此,我们将从MBCs和B10细胞的数量和功能变化在免疫剂量介导的疟疾红内期ITV长效保护性下降中所起作用方面进行研究。目的:1.探讨免疫剂量能否介导红内期ITV长效保护性差异;2.探讨记忆B细胞数量和功能变化在免疫剂量介导疟原虫红内期ITV长效保护性差异模型中的调节作用;3.探讨B10细胞数量及其相关炎症因子表达变化在免疫剂量介导疟原虫红内期ITV长效保护性差异模型中的调节作用,并探究其作用机制。方法:首先用10⁵约氏疟原虫265株感染的红细胞尾静脉注射感染C57BL/6和BALB/c两种不同品系小鼠,在接种完成后3h,腹腔注射氯喹控制感染,连续10天。每次免疫间隔14天,共免疫3次。在免疫完成后第1、3、6个月检测两种小鼠免疫保护性,并比较其对ITV的敏感性,选出适合用于研究ITV长效保护性下降的小鼠品系。再用不同剂量（10³,10⁵,10⁷）感染的红细胞用以上方法ITV免疫小鼠。免疫完成后不同时间点（第1个月,3个月,6个月）首先用10³约氏疟原虫感染红细胞攻击免疫小鼠,通过薄血膜涂片镜检检测小鼠免疫保护性。然后,收集小鼠脾脏淋巴细胞,通过流式细胞技术检测脾脏B10细胞(CD19⁺CD1d^hiCD5^hi B cells)和MBCs(CD19⁺CD27^mid memory B cells)数量及其表面PD-1表达情况。最后,通过CBA定量检测血清IL-10等相关炎性因子表达水平。结果:实验结果显示,免疫剂量介导的ITV的长效保护性差异与B10细胞分泌的IL-10水平有关。此外,ITV长效保护性下降可能与小鼠脾脏MBCs数量随时间的增加而减少有一定关系。实验结果如下:1.C57BL/6小鼠免疫保护性下降较BALB/c小鼠快,因此选择C57BL/6小鼠构建本次实验的动物模型。2.与10³和10⁵两个较低剂量组相比,10⁷组原虫血症峰值最高。此外,10³组在免疫后第1个月的攻击实验中获得了100%的保护性,并在免疫后6个月内仍然保持了60%以上的保护率。然而,10⁵和10⁷免疫组在免疫后第6个月后仅表现出16.7%的保护率。3.三个免疫组小鼠在免疫完成后第6个月MBC的数量均明显低于免疫后第3个月的数量（10³:p=0.0023;10⁵:p=0.0007;10⁷:p=0.001）。但三个免疫组在三个不同时间点PD-1⁺MBCs的表达无明显差异（p>0.05）。4.在免疫后1个月时,10³和10⁵组小鼠脾脏B10细胞数量显著低于对照组（10³:p=0.0497,10⁵:p=0.0232）,10⁷组显著高于10³组（p=0.0471）和10⁵组（p=0.0128）（图3）。此结果与免疫后第1个月时的保护性实验结果相符。在第3个月时,10⁵组B10细胞数明显低于对照组（p=0.0275）、10³组（p=0.0075）和10⁷组（p=0.0071）。5.IL-10水平与B10细胞数量呈正相关（r=0.41,p=0.015）;相反,IL-6（r=-0.626,p<0.001）和IFN-γ（r=-0.638,p<0.001）与IL-10水平呈负相关。结论:免疫剂量可以介导C57BL/6小鼠疟原虫ITV长效保护性差异,较高的免疫剂量并不会产生更好的长效免疫保护作用;ITV长效保护性下降与小鼠脾脏B10细胞数量增加有关,其通过分泌IL-10负向调控疟疾ITV的长效保护作用。此外,ITV长效保护性下降与小鼠脾脏MBCs数量随时间的增加而减少有一定关系。此结果为设计有效的长效性疟疾疫苗奠定了一定的理论基础。