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重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)是多种原因引起胰酶激活导致胰腺组织水肿、坏死和出血,以致全身脏器功能衰竭的炎症性疾病。虽然内镜括约肌切开术治疗胆结石患者,选择性肠道净化和预防性抗生素的使用可能对治疗胰腺炎是有益的,但是一直没有特效的治疗药物。肠道屏障功能在SAP的恢复中发挥着重要的作用,所以研究影响肠道屏障的因素,减少SAP的肠道损伤,有助于SAP的治疗。近年来姜黄素对SAP的作用越来越受到大家的关注。姜黄素是多酚类化合物,具有抗氧化性、抗炎症反应、抗病毒、抗肿瘤等作用。姜黄素可以引起生长因子、蛋白激酶及转录因子表达的变化。联苯二氟酮EF24是姜黄素的类似物,目前研究EF24主要围绕在促进肿瘤细胞凋亡及发现治疗肿瘤的方法上,尚无EF24与急性胰腺炎及肠粘膜屏障方面的研究报道。Vivek R.Yadav等证明EF24能抑制失血性休克时的炎症反应,因而本研究从抗炎症反应的角度分析姜黄素类似物EF24对急性胰腺炎肠粘膜屏障的作用。目的:本实验旨在通过观察SAP时胰腺、肠道组织学的变化,检测肠道组织p65、Claudin-1蛋白和m RNA的表达情况和血清IL-6、TNF-α的浓度,探索联苯二氟酮EF24对胰腺炎肠道损伤的作用及机制,为治疗SAP肠道损伤提供新的思路。方法:1将60只SD大鼠随机分成空白对照组(CON)、重症急性胰腺炎组(SAP)和联苯二氟酮EF24组(EF24),每组再分为6h、12h 2个亚组,每组各10只大鼠。2 SAP组、EF24组大鼠给予腹腔内注射20%L-精氨酸3.0g/kg,间隔1h后,注射同等剂量的L-精氨酸;CON组大鼠给予腹腔内注射与L-精氨酸同等剂量的0.9%Na Cl,间隔1h后,再次注射同等剂量的Na Cl;造模成功后1h,SAP组大鼠给予腹腔内注射联苯二氟酮EF24(0.4mg/kg);Con组、EF24组大鼠给予腹腔内注射同等剂量的聚乙二醇400(聚乙二醇:0.9%Na Cl=1:1)。3分别于造模后6h、12h留取胰腺组织、肠道组织和血液,检测血清内IL-6、TNF-α水平,留取组织标本,通过HE染色观察肠道、胰腺的组织学变化,采用RT-PCR、Western-blot的方法观察比较三组肠道p65、Claudin-1蛋白及m RNA的表达差异。4所有数据采用(x±S)表示,应用SPSS13.0软件包进行统计学数据处理。设α=0.05,P<0.05为差异显著,具有统计学意义。结果:1 HE染色结果示:SAP组肠道和胰腺组织病理损伤程度随时间的延长逐渐加重;EF24组比SAP组各时间点肠道与胰腺组织病变程度有所减轻。2血清TNF-α的水平:SAP组与CON组各时间点比较,大鼠血清TNF-α浓度显著升高(P<0.01);EF24组与CON组各时间点比较,大鼠血清TNF-α水平明显升高(P<0.05);EF24组与SAP组相比明显下降(P<0.05);各组两个亚组之间相比,CON组、EF24组6h、12h两个亚组无显著差异(P>0.05),只有SAP组12h组显著高于6h组,具有统计学意义(P<0.01)。3血清IL-6水平:SAP组与CON组各时间点比较,大鼠血清IL-6水平显著升高(P<0.01);EF24组与CON组各时间点比较,大鼠血清IL-6浓度明显升高(P<0.05);EF24组与SAP组相比显著下降(P<0.05);各组两个亚组之间相比,三组6h、12h两个时间点之间均无显著差异(P>0.05)。4肠道组织Claudin-1 m RNA表达情况:SAP组肠道组织Claudin-1m RNA的量较CON组明显减少,具有显著统计学意义(P<0.01);EF24组与CON组各时间点比较,肠道组织Claudin-1 m RNA表达量显著减少(P<0.05);EF24组与SAP组比较Claudin-1 m RNA的量明显上升,有显著的统计学意义(P<0.05);CON组、EF24组Claudin-1 m RNA量6h、12h时间点相比无显著差异(P>0.05),SAP组两个时间点相比,6h m RNA的量明显高于12h,且有显著差异(P<0.01)。5肠道组织p65 m RNA表达情况:SAP组和EF24组p65 m RNA的量较CON组均上升(分别P<0.01;P<0.05);EF24组与SAP组相比p65 m RNA的量明显下降,有显著差异(P<0.05);CON组、EF24组p65 m RNA量6h、12h时间点相比无显著差异(P>0.05),SAP组6h、12h时间点相比,12h m RNA的量明显高于6h,且有显著统计学差异(P<0.05)。6肠道组织Claudin-1蛋白表达情况:SAP组与CON组各时间点Claudin-1蛋白量相比均显著降低(P<0.01),差异有统计学意义;EF24组与CON组比较Claudin-1蛋白量明显下降,有显著统计学差异(P<0.05);EF24组与SAP组相比显著上升(P<0.05);SAP组两个亚组相比,6h蛋白的量明显高于12h,且有统计学差异(P<0.01)。7肠道组织p65蛋白表达情况:SAP组与CON组各时间点p65蛋白量相比均显著升高(P<0.01),差异有统计学意义;EF24组与CON组比较p65蛋白量明显升高,有显著统计学差异(P<0.05);EF24组与SAP组相比显著下降(P<0.05);SAP组两个亚组相比,12h蛋白的量明显高于6h,且有统计学差异(P<0.01);EF24组6h、12h组比较,6h蛋白的量高于12h(P<0.05),有显著统计学差异。结论:1 EF24能上调Claudin-1的表达量,对L-精氨酸诱导的SAP大鼠肠粘膜的完整性有保护作用,能缓解SAP肠粘膜屏障的损伤;2 EF24能抑制促炎细胞因子TNF-α、IL-6的表达,抑制SAP的炎症反应,促进SAP肠道损伤的恢复;3 EF24缓解SAP肠粘膜屏障损伤的机制可能是:抑制NF-κB的激活及下调NF-κB诱导的促炎因子TNF-α、IL-6。