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蓝舌病(Bluetongue,BT)是由蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)引起的非接触性的经媒介昆虫库蠓(Culicoides)传播感染绵羊、山羊和牛等多种家养和野生反刍动物的疾病。该病毒属于呼肠孤病毒科环状病毒属,目前已有27个血清型。该病的感染与传播受到库蠓活动的影响。BT以发热、口腔黏膜及舌头充血、糜烂,严重时舌头发绀为特征性临床症状,并能引起妊娠母畜流产、死胎等,对养殖业造成重大损失。本实验根据新疆蓝舌病流行病学调查的历史资料及近几年的BTV血清学调查结果和媒介昆虫库蠓的生活习性,选择新疆尉犁县作为监控点,并放置哨兵动物绵羊5只、山羊5只和牛10头。从2014年5月25日,每周定期采取血样,共采样21次,采集血清和肝素钠抗凝血各420份。采用BTV竞争性ELISA方法检测哨兵动物血清,对BT感染情况进行血清学检测;采集蓝舌病抗体由阴转阳的哨兵动物血液样品接种BHK-21进行BTV病毒分离;对分离时出现细胞病变(CPE)的样品,采用BTV抗原捕获ELISA、BTV群特异性片段VP7的RT-PCR扩增及透射电镜形态学观察,对CPE样品进行BTV血清群的鉴定。再采用BTV型特异性片段VP2的RT-PCR扩增、1~24型的血清及病毒中和实验,鉴定BTV分离毒株的血清型。结果显示:BTV竞争性ELISA方法共检出8只哨兵动物血清转阳,其中绵羊转阳率15%(3/20),转阳时间为6月~7月;山羊转阳率25%(5/20),转阳时间为9月~10月,牛未发生转阳。根据转阳时间可看出绵羊的易感早于山羊。转阳哨兵动物抗凝血接种BHK-21细胞,有7份血样出现CPE,主要表现为细胞皱缩、变圆、团聚现象,随后开始脱落,间隙加大,形成空斑。分离株经BTV抗原捕获ELISA检测均为阳性;阳性分离毒株电镜下观察呈现典型BTV形态特征:中心的病毒颗粒与核衣壳分界明显,并被病毒表面的绒毛层包围,大小约70~80 nm;分离毒株TCID50在10-3.33/0.1 m L~10-5/0.1 m L之间;BTV群特异性片段VP7基因扩增、测序比对、遗传进化分析与BTV序列的同源性最高为80%~82%。经以上鉴定7株分离毒株均为蓝舌病病毒。病毒中和试验结果表明本次分离毒株及相应血清与现有BTV 1~24型均无中和保护能力,每孔均发生CPE;型特异性片段VP2测序结果NCBI比对显示与现有的BTV血清型毒株同源性从64%到70%不等,与其他病毒无同源性。由此可得7株分离毒株属于BTV血清群,但不属于现有的BTV血清型。结果表明:本试验首次从新疆分离到了非BTV 1~24型的BTV新毒株,暂定名为XJ/1/2014~XJ/7/2014。初步判定其为BTV的变异株,具体血清型鉴定尚需进一步研究确定。