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目的:1.探究不同包装质粒和包膜质粒在病毒包装中对转染效率的影响;2.探究不同慢病毒包装方法对转染效率的影响;3.探究不同质粒总量和转染试剂浓度比对转染效率的影响;4.探究在转染过程中,转染增强剂浓度对转染效率的影响。方法:本实验采用慢病毒三质粒包装法。1.在包装方法相同的前提下,使用不同的包装质粒p De L8.9和Ps AX2,不同的包膜质粒VSVG和OG来进行转染对比;2.在包装质粒相同的前提下:(1)采用Li P2000包装方法,转染试剂与质粒总量按照质量比为1、1.5、2、2.5进行转染对比。(2)采用PEI包装方法,转染试剂与质粒总量按照质量比为3、6、9、12进行转染对比。(3)采用磷酸钙包装方法,通过调整培养液中磷酸钙加入的量进行转染对比;3.在CAR转染CIK中,调整培养液中加入的病毒浓缩液的量和将培养液中Polybrene的浓度[mg/m L]分别设置为2、4、6、8进行转染对比。结果:1.PEI转染时,质粒为PSMA-CAR(目的质粒)、VSVG和Pdel8.9的实验组,结果分别为23.36%、16.32%、22.29%、32.93%。质粒为PSMA-CAR、Ps AX2和OG的实验组,结果分别为52.7%、62.47%、64.75%、63.41%。当质粒为PCHD-CAR(空载)、VSVG和Pdel8.9的实验组,结果分别为74.6%、84.3%、84.12%、56.79%;2.LIP2000转染时,质粒为PSMA-CAR、Ps AX2和OG的实验组,结果分别为48.78%、57.99%、70.43%、62.55%。质粒为PCHD-CAR、Ps AX2和OG的实验组,结果分别为75.07%、70.17%、74.67%、83.5%;3.磷酸钙转染法时,质粒为PSMA-CAR、Ps AX2和OG的实验组,结果分别为5.84%、3.72%、2.36%、1.51%;4.在Polybrene实验组中,结果分别为:3.6%、2.39%、2.20%、2.38%。结论:1.采用包装质粒Ps AX2和包膜质粒OG时转染效率更高;2.PEI转染法和LIP2000转染法转染效率相当,但LIP2000法更高。质粒总量和加入的LIP2000量在比例为1:2时转染效率更高;3.浓缩的病毒滴度大于5X10~4TU/m L;4.PSMA-CAR转染CIK时,培养液中Polybrene的浓度为4mg/ml时,转染效率更高。