目的冠心病是动脉粥样硬化导致器官病变的常见类型,是人类致死率最高的慢性疾病之一。随着社会经济的快速发展和人们生活方式的改变,我国冠心病发病率逐年增高且发病年龄逐年降低,如何控制心血管事件的发生并减轻其危害已成为一项重大的公共卫生问题。脂质代谢紊乱是冠心病的发病基础,与冠心病的发病危险密切相关。虽然手术治疗和药物治疗可在一定程度上减少冠状动脉事件的发生,心血管剩余风险仍然存在且药物使用有诸多副作用。冠心病伴随血脂升高,归属为冠心病痰瘀互结证,是冠心病的常见证型之一。当前尽管有大量冠心病治疗药物被使用,针对痰瘀互结证且作用机制明确的中成药却略显不足。活血化痰方是在多年临床实践过程中提炼的治疗冠心病相关症状疗效确切的经验方,采用靶向明确的组方新模式,疗效显著。本研究通过建立高脂血症大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,观察针对痰瘀互结证而设的活血化痰方的心脏保护作用及炎症保护机制,为冠心病痰瘀互结证的中药防治研究提供数据支持。方法1.理论研究通过对冠心病痰瘀理论的历史沿革和现代研究进行梳理,认为冠心病痰瘀互结证病因与寒邪内侵、饮食失调、情志失节、劳倦内伤、年迈体虚等因素有关。主要病机为痰瘀互结,痹阻心脉。临床证候特点可包括：胸闷胸痛,短气心悸,形体肥胖,常伴血脂升高,身体困重,痰多口黏腻,神疲乏力,烦躁失眠；舌苔浊腻,或质暗有瘀斑,脉弦或滑或涩。目前临床治疗冠心病虽有大量方药,专一针对痰瘀互结证而设的中成药却略显不足。而基于病证结合指导和活血化痰理论组成的活血化痰方可有发挥其活血化痰,宽胸祛瘀的功效,适用于冠心病痰瘀互结证。2.实验研究(1)210只雄性wistar大鼠(120-140g)随机分为7组,分别为普通模型组、高脂假手术组、高脂模型组、瑞舒伐他汀钙组和活血化痰方高中低三个剂量组。采用高脂饲料预先喂养大鼠7周后,眼眶取血,分离血清,全自动生化分析仪检测血脂,确定血脂升高后分别进行给药：普通模型组、高脂假手术组、高脂模型组给予0.25%羧甲基纤维素钠,瑞舒伐他汀钙组给予瑞舒伐他汀钙,活血化痰方三个剂量组分别给予高、中、低剂量。给药7天后行冠状动脉左前降支结扎术,缺血50min后,予以复灌,建立心肌缺血再灌注模型。分别于术前、术后即刻、术后24小时记录射血分数EF值,于复灌24小时行evans blue-TTC染色法染色心脏,计算大鼠心肌梗死面积百分比。取血分离血清,ELISA法检测血清中超敏C反应蛋白hs-CRP、白介素IL-1β、IL-10、IL-18、肿瘤坏死因子TNF-α和黏附分子ICAM-1、VCAM-1含量,确定活血化痰方最优剂量。(2)80只雄性wistar大鼠按相同方法建立高脂血症大鼠心肌缺血再灌注模型(活血化痰方只取最优剂量组),于复灌2小时剪取心脏,观察心肌组织形态和心肌组织分子生物学变化,剪取结扎线下1mm厚度心脏切片进行HE染色,Western blot法检测缺血边缘区心肌组织中TLR、NF-κBP56、IL-1β、IL-18、NLRP3的蛋白表达水平,荧光定量PCR检测心肌组织中TLR4、NF-κBP56、NLRP3 的 mRNA表达水平,以及心肌组织中microRNA-223的表达水平。结果1.活血化痰方药效作用(1)梗死面积百分比：高脂模型组的梗死面积百分比高于其余各组,与瑞舒伐他汀钙组和高剂量组之间均有极显著差异(P<0.01),与低剂量组、普通模型组有显著差异(P<0.05),与中剂量组之间无显著差异(P>0.05)。活血化痰方三个剂量组之间比较,高剂量组梗死面积百分比小于其余两组,与低剂量组之间无显著差异(P>0.05),与中剂量组有显著差异(P<0.05)。(2)射血分数EF：术前高脂模型组与其余各组之间P值均>0.05,证实各组之间在术前EF值无差异。术后即刻,高脂模型组EF值低于其余各组,与低剂量组存在显著性差异(P<0.05),与高脂假手术组存在极显著差异(P<0.01),与其余各组之间无显著差异(P>0.05)。术后24h高脂模型组低于其余各组,与中剂量组存在显著差异(P<0.05),与其余各组均存在极显著差异(P<0.01)。活血化痰方三个剂量组之间比较,术后24h高剂量组高于中剂量组、低剂量组,但均无统计学意义(P>0.05)。(3)超敏C反应蛋白hs-CRP：高脂模型组高于其余各组。与高剂量组、低剂量组有极显著差异(P<0.01),高剂量组低于瑞舒伐他汀钙组、中剂量组、低剂量组,但组间无统计学意义(P>0.05)。2.活血化痰方对炎症因子、炎症细胞的影响(1)白介素：高脂模型组的抗炎因子IL-10含量低于其余各组,与瑞舒伐他汀钙组、高剂量组之间均存在极显著差异(P<0.01)。高脂模型组致炎因子IL-1β、IL-18水平高于其余各组,与瑞舒伐他汀钙组和高剂量组之间存在显著或极显著差异。活血化痰方三个剂量组之间,高剂量组最优,低剂量组次之,中剂量组最差。高剂量组与瑞舒伐他汀钙组之间无显著差异(P>0.05)。(2)肿瘤坏死因子TNF-α：高脂模型组TNF-α含量高于其余各组,与瑞舒伐他汀钙组、高剂量组、普通模型组、高脂假手术组均有极显著差异(P<0.01)。高剂量组高于瑞舒伐他汀钙组(P<0.05),低于中剂量组和低剂量组(P<0.05)。(3)黏附分子：高脂模型组ICAM-1、VCAM-1含量均高于其余各组,ICAM-1与普通模型组、高脂假手术组、瑞舒伐他汀钙组之间均有极显著差异(P<0.01),与高剂量组之间存在显著差异(P<0.05)。VCAM-1与普通模型组、高脂假手术组、瑞舒伐他汀钙组、高剂量组之间有极显著差异(P<0.01),与低剂量组之间存在显著差异(P<0.05)。活血化痰方高剂量组与瑞舒伐他汀钙组之间无显著差异(P>0.05)。高剂量组优于低剂量组和中剂量组。(4)病理结果：高脂模型组可见心肌纤维排列紊乱,有明显心肌细胞坏死,出现不同程度的核溶解、分裂,局部细胞轮廓消失,出现颗粒变性和空泡变性,白细胞大量增加。而活血化痰方高剂量组和瑞舒伐他汀钙组无论是在心肌细胞变性的程度还是炎症细胞浸润程度都明显优于高脂模型组。3.活血化痰方对miR-223/PPRs炎症途径的影响(1)TLR4/NF-κB途径：活血化痰方组的NF-κB代表亚型NF-κBP56、TLR4的蛋白表达水平和mRNA的表达水平均显著低于高脂模型组(P<0.01),活血化痰方组NF-κBP56蛋白表达量低于瑞舒伐他汀钙组,TLR4蛋白表达量高于瑞舒伐他汀钙组,但两者之间无统计学意义(P>0.05)。活血化痰方组NF-κBP56和TLR4的mRNA表达水平低于瑞舒伐他汀钙组。(2)NLRP3途径：高脂模型组NLRP3的蛋白表达量和mRNA高于其余各组,与瑞舒伐他汀钙、活血化痰方组之间均存在显著差异(P<0.05),活血化痰方组与瑞舒伐他汀钙组之间无显著差异(P>0.05)。高脂模型组的IL-1β、IL-18的蛋白表达量均高于其余各组,组间存在显著或极显著差异。活血化痰方组的IL-1β蛋白表达量高于瑞舒伐他汀钙组(P<0.05)而IL-18则低于瑞舒伐他汀钙组(P>0.05)。(3)miR-223表达：高脂模型组miR-223的表达水平高于其余各组,与活血化痰方组、普通模型组、假手术组之间存在极显著差异(P<0.01),与瑞舒伐他汀钙组之间存在显著差异(P<0.05)。活血化痰方组低于瑞舒伐他汀钙组,但两者之间无显著差异(P>0.05)。结论1.基于活血化痰理论与病症结合指导组方的活血化痰方可起到化痰宽胸,活血祛瘀的作用,适用于冠心病痰瘀互结证。2.高脂血症可降低心肌缺血再灌注损伤的心功能,升高梗死面积百分比,加重心肌细胞变性,加重炎症细胞浸润,升高炎症因子水平,升高微小RNA及相关模式识别受体水平,从而加重心肌缺血再灌注的炎症损伤,客观显示了冠心病痰瘀互结证的实质。3.活血化痰方可通过有效降低梗死面积百分比,改善高脂血症大鼠心肌缺血再灌注损伤的心功能,改善炎症标志物水平,改善心肌细胞变性,对心肌缺血起到明显保护作用。4.活血化痰方可通过减缓炎症细胞浸润,改善白介素、肿瘤坏死因子、黏附分子等多种炎症因子水平,从改善炎性小体等多条模式识别受体介导通路以及改善基因表达水平层面发挥其炎症保护作用。