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目的：检测肿瘤相关抗原GC结合因子2(GC binding factor2, GCF2)在人正常组织、肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma, HCC)组织及对应癌旁组织中的表达,初步探讨GCF2的表达与HCC的关系；构建GCF2基因同源片段的原核重组表达质粒,表达并纯化6His×GCF2同源片段融合蛋白,为其血清学检测奠定基础。方法：(1)采用免疫组织化学方法检测人源58例HCC组织及其对应癌旁组织、21例正常肝组织、14例正常结肠组织、15例正常胃组织、15例正常肺组织、12例正常子宫组织中GCF2表达情况,并采用肺癌、乳腺癌和睾丸癌组织作为阳性对照；并结合肝癌患者的临床病理资料进行统计分析,初步探讨GCF2与HCC的关系。(2)依据GeneBank公布GCF2基因的开放阅读框设计引物,以人肝癌组织cDNA为模板,使用RT-PCR扩增GCF2基因同源片段(1-942bp)；通过基因工程将GCF2基因同源片段重组到pColdⅢ原核表达载体上,经测序鉴定重组质粒后,将鉴定正确的重组质粒转化表达宿主菌Rosetta进行表达,经Ni-NTA亲和树脂纯化6His×GCF2融合蛋白；所得6His×GCF2融合蛋白进行串联飞行质谱鉴定。结果：(1)GCF2在人正常肝、结肠、胃和子宫组织中均有表达。正常肝组织中定位于胞核和胞质,结肠、胃和子宫组织中定位于细胞质,在正常肺组织未见表达,且在正常肝组织中的表达显著高于上述其他正常组织(P<0.05)。(2)GCF2蛋白在HCC组织和对应癌旁肝组织中的定位,与正常肝组织相似,表达定位于胞核和胞质；GCF2在正常肝组织和癌旁肝组织中的阳性表达率及表达量均显著高于HCC组织：GCF2在HCC组织中的阳性率为31.0%(18/58),对应癌旁肝组织中的阳性率为84.5%(49/58),而在正常肝组织中的阳性率为90.5%(19/21)(P<0.05)。(3)所得数据经SPSS软件统计,结合肝癌患者临床病理资料分析结果为：GCF2在HCC组织中的阳性表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、临床分期、有无肝硬化基础、AFP及HBsAg情况之间差异无统计学意义(P>0.05)。(4)构建pColdⅢ/GCF2942原核重组表达质粒,测序数据与NCBI上已有序列进行比对,结果证实GCF2同源片段已正确插入pColdⅢ表达载体中,第942位碱基为同义突变,不影响蛋白功能。(5)验证正确的重组表达质粒转入Rosetta宿主菌后进行诱导培养并电泳检测,显示上清液中可见诱导条带,初步确定已诱导表达可溶性的6His×GCF2融合蛋白；表达的6His×GCF2融合蛋白经Ni-NTA亲和树脂纯化,过柱洗脱后经电泳鉴定目的蛋白成功挂柱,证明6His×GCF2融合蛋白已纯化。结论：(1)GCF2在人正常肝、结肠、胃和子宫组织中均有表达。正常肝组织中定位于胞核和胞质,结肠、胃和子宫组织中定位于细胞质,正常肺组织未见表达；正常肝组织中的阳性率显著高于上述其他正常组织。(2)GCF2蛋白在HCC组织和对应癌旁组织中的定位,与正常肝组织相似,表达定位于胞核和胞质；GCF2在正常肝组织和癌旁肝组织中的阳性表达率及表达量均显著高于HCC组织。(3)GCF2在HCC组织中的阳性表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、临床分期、有无肝硬化基础、AFP及HBsAg情况无显著相关性。(4)成功构建GCF2基因同源片段的原核重组表达质粒pColdⅢ/GCF2942,表达并纯化6His×GCF2同源片段融合蛋白,串联飞行质谱鉴定所得目的蛋白为GCF2蛋白。