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猪瘟(classicalswinefever，CSF)是由猪瘟病毒(classicalswinefevervirus，CSFV)引起猪的一种以稽留高热、出血、梗死、坏死和高死亡率为主要特征的高度接触性传染病。CSFV属于黄病毒科、瘟病毒属，该属还有牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和绵羊边界病病毒(BDV)。CSFV是一种单股正链RNA病毒，基因组长约为12.3kb，含有唯一的开放阅读框架，编码4种结构蛋白(C、E1、E2和Erns)和7种非结构蛋白(Npro、p7、NS2-3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)。CSFV只有一个血清型，可分为3个基因群和10个基因亚群，有研究认为基于NS5B基因的分类是最可靠的。
本文旨在建立一种能区分CSFV强毒和弱毒的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)检测方法。根据GenBank上登录的所有CSFV基因组全序列，选择保守区设计了一对CSFV通用引物，并在该对引物跨越区域的内部设计了猪瘟兔化弱毒疫苗和强毒特异性引物，建立了一种能区分猪瘟强毒和弱毒的RT-nPCR鉴别诊断方法。首先用PK-15细胞对猪瘟病毒Shimen株、HCLV株和15份黑龙江省采集的疑似猪瘟病料进行了病毒分离与繁殖，应用该方法从猪瘟兔化弱毒疫苗和Sbimen强毒株基因组中扩增出了大小分别为447bp和343bp的一条特异性片段，从两种病毒基因组混合物中扩增出了大小为447bp和343bp的两条特异性片段，但对牛病毒性腹泻病毒和其它常见猪源病毒细胞培养物以及正常细胞基因组进行检测时均为阴性。该方法可以检测出0.04pg的CSFVRNA。并利用该方法对人工感染的5头猪全血中的病毒进行了检测，检出时间早，对人工感染猪最早可于感染后2天检出；检测耗时短，最快可在6小时内完成。对从黑龙江省、河南、吉林和其他地区采集的共41份疑似猪瘟病料进行了检测，结果表明，有27份类似猪瘟强毒，1份类似弱毒疫苗。限制性片段长度多态性和种系发生分析证实了RT-nPCR的检测结果。本研究建立的RT-nPCR可以有效区分猪瘟强毒和弱毒，减少了未感染的免疫猪被误杀的可能性。