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口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdisease virus,FMDV)引起的烈性传染病,其爆发、流行会带来巨大的经济损失。目前国际上常用的口蹄疫疫苗为灭活疫苗,但是如果灭活不完全可能会导致病毒传染。因此需要开发一种安全有效的新型口蹄疫疫苗。FMDV的VP1蛋白含有多个重要的抗原表位,能有效的诱发FMDV特异的免疫反应,因此针对VP1设计的疫苗是当前FMDV疫苗研究的热点。粘膜免疫系统是抵抗病原微生物入侵的重要屏障。FMDV作为一种传染性疾病,粘膜IgA对动物抵抗病毒的入侵可能也具有不可忽视的作用。经由粘膜途径免疫的FMDV疫苗具有良好的应用前景。CT是目前发现的最强的粘膜佐剂,但具有较大毒性,而其B亚基(CTB)具有很强的抗原呈递能力,添加痕量的CT或单独使用就具有很好的佐剂活性。因此利用以CTB为主的混合佐剂来研制抗A、O型FMDV的双价粘膜疫苗具有较大实用意义。本研究主要工作是选择合适的载体原核表达A、O型抗原决定簇和HBcAgcDNA融合基因(融合基因先前已由本实验设计完成,命名为t8-3s),表达纯化霍乱毒素B亚基(CTB表达载体有本实验室张国广构建)。同时构建CTB-t8-3s融合表达载体。将上述三个蛋白表达纯化后做蛋白的活性或免疫原性检测。然后将CT、t8-3s混合物和CTB-t8-3s分别经皮下、鼻粘膜、口服途径免疫小鼠。实验结果证实t8-3s可以诱发抗口蹄疫标准抗体的抗体,说明它具有开发成口蹄疫疫苗的潜力。CTB、tS-3s混合物和CTB-tS-3s经鼻粘膜途径免疫组的小鼠具有较高的血清IgG和粘膜IgA,说明CTB可以作为此候选口蹄疫疫苗的粘膜佐剂,添加灭活霍乱弧菌的实验组具有更高的IgG和IgA水平,暗示CTB添加痕量CT的佐剂活性更高。