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第一部分：抗人KAch胞外环肽段抗体的制备和鉴定目的：为研制人乙酰胆碱敏感性钾通道(hKAch)新的、特异性阻滞剂,以hKAch胞外环肽段为抗原,免疫动物,制备针对hKAch胞外环肽段的特异性抗体并对抗体进行鉴定方法：根据氨基酸的亲水性,表露性,柔韧性及抗原性等,通过计算机软件分别自hKAch通道Kir3.1和Kir3.4亚基P环胞外段筛选出两段氨基酸序列Kir3.1-E112和Kir3.4-E113,作为抗原决定簇,采用PSSM8多肽合成仪固相法合成两段多肽。采用戊醛偶联法,以BSA作为载体蛋白合成多肽一BSA完全抗原,每隔两周免疫新西兰大白兔共五次,取血后,采用亲合层析法分离纯化抗体。酶联免疫吸附试验(ELISA)进行抗体效价检测,并采用免疫荧光细胞化学法和免疫印迹法对抗体进行鉴定。结果：酶联免疫吸附试验结果显示,两种免疫血清均能特异性识别相应的抗原肽,抗体效价均自第4周开始逐步升高,免疫结束时都达到相对稳定较高的水平(1：12800)。免疫荧光和免疫印迹结果显示抗体均能特异性的识别表达于人心房肌细胞的hKAch通道蛋白,而不与稳定表达于人心房肌细胞或HEK293细胞系上的Nav1.5、Cav1.2、HERG、hKCNQ1、Kv1.5通道蛋白结合。与相应的过量抗原肽孵育后抗体与hKAch通道蛋白结合作用消失。结论：成功出制备能特异性识别表达于人心房肌细胞hKAch通道蛋白的两段抗体第二部分：抗人KAch胞外环肽段抗体对人心房肌细胞IKAch和动作电位的影响目的：研究已制备的两段抗hKAch胞外环肽段抗体对人心房肌细胞IKAch的影响,筛选出对IKAch阻滞作用最强的抗体,并研究该抗体对人心房肌细胞动作电位的影响,从而证实制备的抗体能否作为一种新型IKAch阻滞剂,用于房颤的治疗方法：采集行心脏外科手术的窦性心律患者和房颤患者右心耳组织,两步酶解法分离单个人心房肌细胞,首先采用全细胞膜片钳技术观察两种抗体对窦性心律患者心房肌细胞IKAch的影响,筛选出对IKAch阻滞作用最强的抗体,再观察该抗体对房颤患者心房肌细胞IKAch的影响；其次采用全细胞穿孔膜片钳电流钳模式分别观察筛选出的抗体对窦性心律患者和房颤患者心房肌细胞动作电位的影响。结果：抗hKAch胞外环肽段Kir3.1-E112抗体对窦性心律患者IKAch无明显抑制作用；不同浓度(30nM、60nM120nM)的抗hKAch胞外环肽段Kir3.4-E113抗体对窦性心律患者IKAch均有明显的阻滞作用,且呈浓度依赖性；120nM抗hKAch胞外环肽段Kir3.4-E113抗体对房颤患者IKAch也有明显的抑制作用；120nM抗hKAch胞外环肽段Kir3.4-E113抗体对窦性心律患者和房颤患者心房肌细胞的动作电位时程皆有延长作用,以延长APD50和APD90为主；与过量hKAch胞外环肽段Kir3.4-E113孵育后,抗hKAch胞外环肽段Kir3.4-E113抗体对IKAch的抑制作用消失。结论：抗hKAch胞外环肽段Kir3.4-E113抗体能有效阻滞窦性心律患者和房颤患者心房肌IKAch,从而延长两组患者心房肌细胞的动作电位时程,可作为IKAch的一种新型阻滞剂,用于房颤的治疗。第三部分：抗人KAch胞外环肽段Kir3.4-E313抗体特异性的鉴定目的：为验证抗hKAch胞外环肽段Kir3.4-E113抗体的特异性,评价其作为新型IKAch阻滞剂治疗房颤的安全性,分别观察其对稳定表达于人心房肌细胞和HEK293细胞系上的其他心脏离子电流的影响。方法：采集行心脏外科手术的窦性心律患者和房颤患者右心耳组织,两步酶解法分离单个人心房肌细胞；利用转染技术建立稳定表达IKr和IKs电流的HEK293细胞系；利用全细胞膜片钳技术和穿孔膜片钳技术记录抗hKAch胞外环肽段Kir3.4-E113抗体对稳定表达于人心房肌细胞和HEK293细胞系上的其他心脏离子电流(1Na-、ICA-L、IKr、 IKs、Itol、IKur)的影响。结果：与正常对照组相比,120nM抗hKAch胞外环肽段Kir3.4-E113抗体对稳定表达于人心房肌细胞和HEK293细胞系上的其他心脏离子电流：INa、Ica-L、IKr、IKsIto1、IKur皆无明显抑制作用。结论：抗hKAch胞外环肽段Kir3.4-E113抗体对心脏其他离子电流无影响,特异性高,可作为一种新的、特异性IKAch阻滞剂,可能为房颤的治疗提供一条新的、更为安全有效的途径。