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研究背景肝纤维化（Hepatic Fibrosis，HF）是肝脏对各种原因所致的慢性肝损伤的过度修复反应，是慢性肝病发展成为肝硬化必经的病理过程[1,2]。早期的肝纤维化如给予有效的治疗可以发生逆转，早期诊断和治疗可阻止其向肝硬化和肝癌方向的恶性发展[3,4]。目前，肝纤维化诊断的金标准是肝组织活检和病理学检查[5]，然而肝脏穿刺是一种有创性检查，具有一定风险[6,7]，因此寻找准确、可靠的无创检查方法为肝纤维化的病情判断和疗效考核提供依据非常有必要[8,9]。近年来，随着超声诊断技术的发展，超声弹性成像（Ultrasonic Elastography，UE）技术受到广泛关注并迅猛发展。它能客观、无创、真实地还原肝脏受累部位的情况及肝脏形态特点，有望成为新的诊断肝纤维化及早期肝硬化的无创手段。研究目的本研究拟通过大鼠肝纤维化模型，应用德国Siemens Acuson S2000型高档彩色多普勒超声诊断仪的声触诊组织量化技术（Virtual Touch Tissue Quantification，VTQ）诊断大鼠肝纤维化程度，以肝生化指标、病理学诊断作为金标准，评价VTQ检查结果的准确性及灵敏性，为VTQ的临床应用提供重要的基础资料。材料与方法1、50只SD大鼠在超声监测下使用4%硫代乙酰胺(TAA)皮下注射法制备大鼠肝纤维化模型（模型组45只，对照5只）。首次注射采取大腿内侧腹壁皮下注射4%TAA生理盐水溶液1ml为初始剂量诱导制模，从第二次用药开始调整药量为200mg/kg。每周称重并使用超声诊断仪进行VTQ检查。根据检查结果对用药次数进行调整。建模开始后5w、9w在模型组中随机抽取15只大鼠，对照组中抽取2只大鼠，经超声检查采集数据后处死并采血进行血清学检查，肝脏取材作病理分析，其余动物在12w全部以同样方法处死取材。2、大鼠麻醉脱毛后经皮使用德国Siemens Acuson S2000型高档彩色多普勒超声诊断仪的声触诊组织量化技术（Virtual Touch Tissue Quantification， VTQ）及弹性硬度半定量分析诊断大鼠肝纤维化程度，收集肝脏纤维化数据。检测部位均为右侧肝叶组织，弹性成像的感兴趣区域均尽量避开肝叶分界处及肝内大血管。每只大鼠均选用不同的区域测量7次。3、检测患鼠肝脏生化指标（ALT、AST、HA、LN和IV-C等），以组织病理学结果及评分作为金标准，采用统计学方法分析评价声触诊组织量化技术对大鼠肝纤维化模型的病变程度诊断敏感性和特异性，并在此基础上探讨声触诊组织量化技术对大鼠肝纤维化模型分级的准确程度及诊断应用价值。结果1、动物模型造模成功：模型组动物共45只，对照组4只。模型组造模期间死亡5例，其中3例（60%）死于5w前，提示诱导失败，6w－8w未发生模型动物死亡，9w后因动物肝功能损害明显出现了正常死亡2例。经过12w的造模，成功建模： S1-S2期12只，S3-S4期11只，肝硬化期14只。各期肝纤维化及肝硬化总造模成功36例，成功率为90%，全部纳入实验研究。2、病理诊断结果：S1－S4模型组动物肝脏肿胀，颜色暗红，较正常变浅，符合肝纤维化表现。肝硬化模型组动物肝脏失去光泽，质地变硬，体积萎缩，表面凹凸不平，呈小颗粒状改变，符合肝硬化表现。HE染色及Masson三色染色均提示动物模型造模成功并符合实验设计分组要求。3、肝纤维化不同分期血清学纤维化指标变化：各血清学纤维化指标随纤维化分期进展依次升高，在肝硬化期达到高峰。血清学正态性检验显示AST、ALT、IV-C、HA的分布不符合正态分布，而LN符合正态分布。4、影像学VTQ数据统计表明：建模成功的36例肝纤维化/肝硬化动物及5例对照测得：VTQ值测得最低0.79，最高3.56。对照组1.25±0.20，A组1.52±0.22，B组1.89±0.18，C组2.45±0.34。组组间两两相比统计学差异有显著性意义（p=0.000）。Control，Group A，Group B，Group C分布区间有明显聚集，区分良好。5、VTQ结果分析显示ALT、IV-C与VTQ各项指标间均存在正相关关系，但相关程度不强，相关系数均在0.3-0.4。AST、HA与VTQ各项指标间不存在相关关系，P值均大于0.05。6、VTQ与病理金标准对比，可以构建出判别方程为Y=3.519*VTQ03+3.302*VTQ07-12.813。采用回代验证和交互验证的方法验证该判别方程，结果显示回代验证和交互验证的判别准确率均为92.3%。结论1、通过超声监测下皮下注射TAA法建立SD大鼠梯度肝脏纤维化模型效果良好，超声监测造模组动物死亡率为10%，肝纤维化形成率为90%，效果明显优于传统方法组。根据超声弹性成像结果调整TAA的诱导剂量，可成功诱导大鼠肝纤维化，降低大鼠死亡率，并显著提高肝纤维化形成率和质量。2、通过大鼠肝纤维化模型进行的动物实验显示：以超声弹性成像技术，运用VTQ诊断大鼠肝纤维化程度是可行的。VTQ数值与肝生化指标关系不密切。以病理学诊断作为标准的对比研究表明，VTQ与病理金标准的对比，可以构建出判别方程为Y=3.519*VTQ03+3.302*VTQ07-12.813。采用回代验证和交互验证的方法验证该判别方程，结果显示回代验证和交互验证的判别准确率均为92.3%，具有较高的准确性。