【摘 要】
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目的:紫株属植物具有止血和抗炎作用,前期发现其萜类成分XPC-1具有良好抗炎活性,然而其抗炎机制尚不明确,本研究进一步揭示XPC-1抑制炎症小体激活介导抗炎作用可能的作用机理,为开发具有我国自主知识产权治疗脓毒症候选药物提供科学依据。方法:1.体外研究部分:构建原代腹腔巨噬细胞和THP-1单核细胞炎症小体激活细胞模型,MTT法检测XPC-1对炎症细胞细胞毒性作用;采用Elisa法检测XPC-1对不
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目的:紫株属植物具有止血和抗炎作用,前期发现其萜类成分XPC-1具有良好抗炎活性,然而其抗炎机制尚不明确,本研究进一步揭示XPC-1抑制炎症小体激活介导抗炎作用可能的作用机理,为开发具有我国自主知识产权治疗脓毒症候选药物提供科学依据。方法:1.体外研究部分:构建原代腹腔巨噬细胞和THP-1单核细胞炎症小体激活细胞模型,MTT法检测XPC-1对炎症细胞细胞毒性作用;采用Elisa法检测XPC-1对不同刺激（ATP、Nigericin和MSU）炎症细胞IL-1b和IL-18水平的影响;流式细胞术检测ATP诱导的THP-1细胞Caspase-1激活的影响;实时荧光定量PCR检测ATP刺激的THP-1单核细胞炎症小体相关基因m RNA表达的影响;Western blot法测定XPC-1对ATP刺激THP-1单核细胞的炎症小体激活信号通路的影响。2.体内实验:采用盲肠结扎穿刺法（Cecal Ligation-Peferation,CLP）和腹腔注射LPS诱导脓毒症小鼠模型。观察CLP诱导的脓毒症小鼠生存率;ELISA法检测细菌脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的脓毒症模型小鼠血清中炎症因子（IL-6、IL-1b、TNF-a）水平;HE染色法检测脓毒症模型小鼠肺部病理损伤程度;免疫组化法检测XPC-1对LPS诱导的脓毒症模型小鼠肺部CD11b+炎症细胞浸润作用;流式细胞检测术检测LPS诱导的脓毒症模型小鼠浸润肺的CD11b+F4/80+巨噬细胞比例的影响;流式细胞术检测脓毒症模型小鼠脾淋巴细胞Th1、Th17和Treg细胞表达水水平。结果:1.体外实验结果显示,XPC-1对原代腹腔巨噬半数细胞致死浓度(CC50)为9.62μM;XPC-1药物干预能有效抑制LPS+Nigericin诱导的原代腹腔巨噬细胞炎症因子IL-6、IL-1b、TNF-a的产生（均为P<0.01）;ELISA结果显示,XPC-1浓度依赖性抑制ATP、Nigercin和MSU诱导的THP-1单核细胞炎症因子IL-18和IL-1b的产生水平;流式细胞术检测结果显示,XPC-1浓度依赖性抑制ATP诱导的THP-1单核细胞Caspase-1激活（P<0.01）;荧光定量PCR结果显示,XPC-1药物干预显著抑制ATP诱导THP-1单核细胞NLRP3、IL-1b、TNF-a、IL-6、AIM m RNA的表达,且呈浓度依赖性关系;Western blot检测结果显示,XPC-1显著抑制ATP诱导的THP-1单核细胞NLRP3的蛋白表达及Caspase-1和IL-1b激活。2.动物实验研究结果显示,XPC-1药物干预显著提高CLP脓毒症模型小鼠的生存率,对CLP脓毒症小鼠及LPS诱导的脓毒症小鼠肺损伤具有显著的保护作用;XPC-1干能显著抑制LPS诱导脓毒症小鼠血清炎症因子IL-1b和IL-6的产生,抑制脓毒症小鼠肺组织CD11b+炎症细胞浸润（P<0.05）,显著抑制CD11b+F4/80+巨噬细胞向肺组织的浸润;XPC-1药物干预对Th17细胞（CD4+IL-17A+T cells）、Th1细胞（CD4+IFN-g+T cells）和Treg细胞（CD4+Foxp3+T cells）表达无明显的影响（P>0.05）。结论:紫珠活性产物XPC-1具有显著的抗炎活性和治疗脓毒症的潜能,其作用机理可能与抑制炎症小体激活信号通路有关。
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