SHIV-CN97001感染恒河猴及其体内传代特性的研究

来源 :昆明医学院 昆明医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenanji
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目的:研究SHIV-CN97001接种恒河猴及其体内传代感染恒河猴的特点和致病性,筛选适宜的SHIV病毒株建立SHIV非人灵长类动物模型用于人类AIDS病及其疫苗的研究。 方法:两只恒河猴经静脉注射接种SHIV-CN97001病毒株,第21天分别采血从静脉接种另两只恒河猴进行体内传代,两批接种猴均于接种前第0天,接种后第7、14、21,28、42、56、84、112、140、168、196天分别用EDTA抗凝采血进行血液细胞计数分析,分离血浆和外周血单核淋巴细胞进行SIVP27和HIV-1P24核心抗原检测、前病毒DNA和血浆RNAPCR检测,同时用肝素钠抗凝采血进行流式细胞术分析并分离外周血单核淋巴细胞进行共刺激培养以观察SHIV体外感染和复制的能力。共培养物于培养第3或4天弃上清补加PHA刺激培养的PBMC,第7,14,21,28天保存上清补加PHA刺激培养的PBMC,第10,17,24,31天弃上清补培养液,第35天离心保存上清并冻存细胞沉淀。检测第4,7,14,21,28,35天培养上清中HIV-1P24表达情况。 结果:两批恒河猴接种SHIV感染后在绝大多数检测点均可检测到HIV-1P24病毒抗原,原代猴峰值达到131.9pg/ml,传代猴峰值可达106.7pg/ml。原代接种猴第28天和传代猴第14天以前SIVP27检测均呈阳性。同时,原代接种猴和传代猴中均持续检测到病毒DNA和RNA阳性,表明病毒已整合到宿主细胞中并能正常复制和表达。在猴子外周血单核淋巴细胞共刺激培养上清中也能检测到HIV-1P24病毒抗原,表明病毒也能在体外复制和表达。所有动物在接种感染初期血液分析观察到白细胞和淋巴细胞的一过性快速下降,然后逐渐有所恢复但始终未能达到接种前的正常水平,并且在FACS分析中早期可观察到CD4+T淋巴细胞的急剧降低并维持在低水平范围和CD8+T淋巴细胞的减少。猴子在整个实验过程中饮水、摄食、排泄均保持正常,被毛、体重和精神状况均无显著变化。所有恒河猴自免疫接种至整个实验结束共196天内均保持健康,截止到第365天未发展为猴AIDS病。 结论:SHIV接种可导致恒河猴感染病毒,出现临床病毒感染症状,体内传代后病毒毒力有所增强。从感染病毒的恒河猴中分离得到的外周血单核淋巴细胞通过共培养可感染同种正常猴外周血单核淋巴细胞,表明病毒能在体外复制增殖,但实验期内未导致猴子发展为猴AIDS病,提示病毒可能为弱致病毒株。
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