黑果枸杞的多酚提取工艺、质量评价及其生物活性研究

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黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)是茄科(Solanaceae)枸杞属植物,广泛分布在我国青海、宁夏、甘肃和新疆等西北地区。黑果枸杞中含有丰富的营养成分和生物活性成分,在食品、药品以及保健品领域被广泛开发。其中多酚类成分被认为是黑果枸杞的主要活性成分之一,具有抗氧化、降血糖、降血脂和肠道菌群等生理活性。本文首先对黑果枸杞果实中多酚类成分的提取工艺进行优化,并对不同产地黑果枸杞果实中的总多酚含量进行测定,又采用高效液相法建立不同产地黑果枸杞的HPLC指纹图谱,通过黑果枸杞HPLC指纹图谱的构建,有效表征了黑果枸杞中化学成分的相对差异性,为黑果枸杞产地鉴别及质量评价提供依据。最后评价其体外抗氧化能力,并对抗α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性等药理作用进行了初步探索,为黑果枸杞多酚在抗氧化和降血糖等生物活性方面的开发利用提供了理论依据。主要研究结果如下:1.采用单因素结合响应面的实验方法,对超声辅助甲醇提取黑果枸杞果实中多酚成分的工艺进行优化。获得黑果枸杞多酚的最佳提取工艺:提取时间为29 min,提取温度为43℃,料液比为1:20 g/mL,多酚提取率可达3.67%。2.从青海、甘肃、宁夏、新疆、蒙古5个地区,共收集到12批的黑果枸杞样品。采用Folin-Ciocalte法对不同产地的黑果枸杞中总多酚含量进行测定。结果表明,各产地黑果枸杞总多酚含量比较接近,其中总多酚含量最高的为青海德令哈样品,可达39.32 mg/g DW。从地区分布来看,总多酚含量高低依次为青海>蒙古>新疆>宁夏>甘肃。3.通过高效液相色谱法建立了不同产地黑果枸杞HPLC指纹图谱,选取12批黑果枸杞样品建立对照指纹图谱,采用相对保留时间标定了16个共有峰,12批样品与对照指纹图谱之间相似度在0.857~0.988之间。利用共有峰相对峰面积对12批黑果枸杞样品进行了分析进行主成分分析和聚类分析,聚类分析结果大致可分为3类,其中新疆黑枸杞可单独聚为一类;主成分分析、聚类分析及相似度评价结果相互验证。4.采用清除DPPH自由基、清除ABTS+自由基及总还原能力测定的三种方法,对黑果枸杞多酚的体外抗氧化能力进行探究。结果表明,黑果枸杞多酚在1 mg/mL时,对DPPH自由基清除率和ABTS+自由基清除率分别为61.37%和64.61%;黑果枸杞多酚的总还原能力弱于阳性对照Vc,多酚抗氧化能力呈剂量依赖性,随着浓度增大,抗氧化作用也会增强,说明了黑果枸杞多酚具有良好体外抗氧化活性。5.黑果枸杞多酚对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制能力,以阿卡波糖为阳性对照,探究黑果枸杞多酚的降血糖作用。结果表明,黑果枸杞多酚对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的IC50分别为5.31 mg/mL和36.64μg/mL,说明黑果枸杞多酚具有潜在的降血糖作用。
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