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目的研究血管内皮生长因子C（vascular endothelial growth factor C,VEGF-C）mRNA在宫颈癌、原位癌及正常宫颈组织中的表达情况,分析其在宫颈癌生长与转移中的可能作用。方法应用实时荧光定量PCR法检测并分析48例宫颈癌组织、48例原位癌组织及36例正常宫颈组织标本中VEGF-CmRNA的表达情况,分析其与肿瘤的组织病理类型、病理分化程度、淋巴结转移、肿瘤直径、临床分期之间的关系。结果VEGF-CmRNA在宫颈癌组织、宫颈原位癌组织及正常宫颈组织中的表达量有显著性差异（F=19.21,P＜0.05）,VEGF-C mRNA在宫颈癌组织中的表达显著高于宫颈原位癌组织中的表达（q=9.13,P＜0.05）;VEGF-C mRNA在宫颈原位癌组织中的表达量明显高于正常宫颈组织中的表达（q=4.25,P＜0.05）。宫颈癌组织中VEGF-C mRNA的表达与肿瘤的组织病理类型相关（F=12.01,P＜0.05;q腺癌/鳞癌=3.97,P＜0.05;q腺癌/腺鳞癌=6.35,P＜0.05;q鳞癌/腺鳞癌=3.50,P＜0.05）;宫颈癌组织中VEGF-C mRNA的表达与病理分化程度相关（F=9.76,P＜0.05;qG1/G2=4.01,P＜0.05;qG1/G3=5.33,P＜0.05;qG2/G3=4.24,P＜0.05）;宫颈癌组织中VEGF-C mRNA的表达与淋巴结转移（t=44.15,P＜0.05）相关;宫颈癌组织中VEGF-C mRNA的表达与肿瘤直径（t=39.84,P＜0.05）相关;但宫颈癌组织中VEGF-C mRNA的表达与与宫颈癌的临床分期无明显的相关性（F=2.12,P＞0.05）。结论（1）宫颈癌组织中VEGF-C mRNA表达水平明显高于宫颈原位癌组织及正常宫颈组织,且与临床病理之间有良好的相关性,提示其在宫颈癌生长、转移和预后过程中起着十分重要的作用。（2）VEGF-C可能成为治疗宫颈恶性肿瘤的一个潜在的分子靶点。目的探讨血管内皮生长因子C在宫颈癌细胞生长、增殖中的可能作用。方法采用基于TaqMan探针技术的实时荧光定量PCR法检测体外培养的宫颈癌细胞系Hela细胞、SiHa细胞中VEGF-C mRNA的表达。结果人宫颈癌Hela细胞株中VEGF-CmRNA的表达明显高于人宫颈癌SiHa细胞株中的表达,差别有统计学意义（t=7.1,P＜0.05）。结论VEGF-C在不同增殖能力的宫颈癌细胞株中含量不同,该基因可能与宫颈癌细胞侵袭能力有关,抑制宫颈癌中VEGF-C的表达有望可以抑制宫颈癌的侵袭转移。目的研究针对VEGF-C的小分子干扰RNA（siRNA）介导的RNA干扰（RNAi）技术对人宫颈癌Hela细胞及SiHa细胞中VEGF-C基因及蛋白的靶向抑制作用,同时观察对细胞生长、增殖的影响及形态的变化,探讨针对VEGF-C的siRNA介导RNA干扰技术在宫颈癌基因治疗中的应用前景。方法根据siRNA序列设计原则,设计并合成三条VEGF-C序列特异性小分子干扰RNA（siRNA）及一条阴性对照siRNA,应用德国QIAGEN公司RNAiFectTM Transfection试剂盒转染人宫颈癌Hela细胞及SiHa细胞。筛选出最有效的siRNA干扰序列后,分别于转染后12h、24h、48h、72h,应用实时荧光定量PCR方法检测Hela细胞及SiHa细胞中VEGF-C mRNA的表达,Western Blot方法检测VEGF-C蛋白的表达,MTT及细胞计数法检测siRNA转染对培养细胞生长增殖的影响。结果1.细胞转染人宫颈癌Hela细胞及Siha细胞转染针对VEGF-C的siRNA 6h后于高倍镜下均可见细胞形态发生改变,轮廓不规则,空泡化形成,部分细胞脱落,有细胞碎片形成,细胞数目较对照组明显减少,通过荧光标记siRNA转染后发现转染效率可达85%以上,摄入的siRNA主要位于细胞浆,围绕胞膜排列;空白对照组及阴性对照组细胞形态正常,细胞透明,细胞贴壁状况良好,呈棱形或多角形,数量较转染实验组明显增多。阴性对照组加入转染反应液后细胞形态也发生改变,但换液后,细胞形态很快恢复正常。2.荧光定量PCR检测RNAi后Hela细胞中VEGF-C mRNA表达统计学分析表明,干扰12-72h时间内,实验组与阴性对照组VEGFmRNA的表达量相比明显降低,差异有显著性意义（q值依次为6.44、8.75、7.34、19.23,P＜0.05）;而阴性对照组及空白组VEGF-C mRNA的表达的差异在不同时相均无显著性（P＞0.05）,干扰效果变化明显。3.荧光定量PCR检测RNAi后Siha细胞中VEGF-C mRNA表达转染12、24、48及72h后,实验组VEGF-CmRNA的表达水平均明显下降,与空白对照组相比,差异有统计学意义（q值分别为16.26、21.44、34.67、15.32,P＜0.05）;与阴性对照组比较差异有统计学意义（q值分别为15.35、20.62、30.24、17.04,P＜0.05）;而阴性及空白对照组VEGF-CmRNA的相对表达量在不同时间点比较差异无统计学意义（q值分别为2.02、1.98、1.43、1.08,P＞0.05）。4.Western Blot检测RNAi后Hela细胞中VEGF-C蛋白的表达DAB显色后发现在46.9KD处有一明显条带,与VEGF-C蛋白大小一致。应用图像分析系统对western blot结果进行半定量分析,空白对照为1,不同干扰时间的数值结果与其进行灰度比较。统计学分析发现与对照组相比,RNAi干扰后目的siRNA对VEGF-C蛋白表达均有不同程度的影响,且干扰时间越长,效果越明显,干扰后同一时相各组VEGF-C蛋白的表达有显著性差异（P＜0.05）,干扰后同一时相阴性对照组与空白组之间的差别无统计学意义（t分别为1.01、0.83、0.71、0.42,P均＞0.05）。5.Western Blot检测RNAi后Siha细胞中VEGF-C蛋白的表达结果显示干扰后12-72h内,实验组VEGF蛋白含量明显低于各对照组,差异具有显著性的意义（P＜0.05）,而阴性对照组和空白组相比则差异无统计学意义（t值分别为0.09,0.49,0.80,1.02,P＞0.05）。6.MTT法检测针对VEGF-C的RNAi后Hela细胞的增殖情况MTT法检测表明针对VEGF-C的siRNA对Hela细胞生长有明显的抑制作用,转染后同一时段与空白对照组及阴性对照组细胞有显著性差异（F值分别10.58、16.17、23.39、41.94,P均＜0.05）,转染后阴性对照siRNA12h-72h后对Hela细胞生长增殖无明显抑制作用,与同一时段空白对照组之间比较差异无显著性（t值分别为0.12、0.24、0.06、0.09;P均＞0.05）。7.MTT法检测siRNA对SiHa细胞增殖的影响目的siRNA对细胞生长有明显的抑制作用,不同时段与各对照组细胞相比差异有统计学意义（F值分别为12.94、32.55、29.45、23.30,P＜0.05）;阴性对照siRNA对细胞生长无明显抑制作用,且不同时段与空白对照组相比差异无统计学意义（q值分别为0.75、1.09、0.90、0.60,P＞0.05）。8.细胞计数法检测针对VEGF-C的RNAi后Hela细胞的数量细胞计数法检测表明目的siRNA对细胞数量有明显影响,不同时间段细胞数与空白对照组相比明显减少（F值分别为4.01、5.32、7.89、13.47,P＜0.05）,阴性对照siRNA组对细胞数量无明显影响,不同时段细胞数与空白对照组之间相比差异无显著性（t值分别为0.71、0.49、0.14、0.93,P＞0.05）。9.细胞计数法检测针对VEGF-C的RNAi后Siha细胞的数量细胞计数法检测表明转染后12h-72h各组Siha细胞数均不相同（F值分别为4.23、6.68、7.12、12.1,P均＜0.05）,实验组细胞数明显低于其余各组,差别有统计学意义;空白组、阴性对照组之间差别无统计学意义（t=0.48、0.24、0.38、1.23,P均＞0.05）。结论（1）针对VEGF-C的siRNA可以有效抑制宫颈癌细胞VEGF-CmRNA及其蛋白表达量,抑制细胞生长,表明VEGF-C基因在宫颈癌的发生、发展中具有重要作用。（2）针对VEGF-C的siRNA介导的RNA干扰技术对高表达VEGF-C的宫颈腺癌Hela细胞及低表达VEGF-C的宫颈鳞癌Siha细胞均可引起显著的靶向基因抑制作用。（3）针对VEGF-C的RNA干扰技术为宫颈癌基因治疗提供了新策略,为下一步利用RNA干扰技术抑制肿瘤血管形成以及局部侵袭和远处转移提供研究基础。