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乳链菌肽(nisin)是某些乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L.1actis)产生的一种翻译后修饰小肽,能有效地抑制许多引起食品腐败的革兰氏阳性菌(Gram positive,G +),尤其对芽孢的萌发有强烈的抑制作用,对食品的防腐保鲜有重要意义。本研究针对乳链菌肽(nisin)抑菌谱窄的缺点,选择抗菌谱较广且具有较强抗性的牛乳铁蛋白氨基末端多肽(rbLF-N)为材料,构建融合基因nisin-rbLF-N,并在大肠杆菌BL21(DE3)宿主和毕赤酵母GS115进行表达研究,尝试获得具有较广抗菌谱的融合蛋白。根据Genebank公布的nisin和rbLF-N基因序列设计特异引物,并合成克隆质粒pMD19-T/nisin和提取牛肉基因组通过PCR技术成功获得融合蛋白基因nisin-rbLF-N,并成功构建了pGEM-T easy/nisin-rbLF-N重组质粒。经双酶切验证得到与目的片段大小340bp相符合的片段,测序结果证明与欲扩增的目的基因片段的序列相吻合,其编码的氨基酸阅读框不变。将融合基因克隆到原核表达载体pGEX-4T1中,转化E.coli BL21(DE3)进行诱导表达,将诱导表达的产物进行SDS-PAGE蛋白电泳及抑菌活性检测。试验结果表明,克隆菌经诱导后可表达出可观的融合蛋白,融合蛋白大小为38kD左右,与预测结果一致。融合蛋白以包含体形式存在,包含体经洗涤、尿素溶解、复性后具有干酪乳杆菌(G+菌)抗菌生物活性,但没有大肠杆菌(G-菌)抗菌生物活性。成功构建了核表达载体pPIC9K/nisin-rbLF-N,并将其线性化电转入毕赤酵母表达宿主GS115中。获得362株His+转化子,经含不同浓度G418的YPD平板筛选获得40株高拷贝的重组毕赤酵母菌株。在MM平板上进一步的复筛,从中又筛选出39株表达量较高的菌株。甲醇诱导表达后,发酵液上清经SDS-PAGE检测,获得了大小约为10KDa的目的条带。去糖基化后的融合蛋白做抑菌活性检测,具有抑干酪乳杆菌(G+菌)和大肠杆菌(G-菌)作用。本试验成功克隆了融合基因nisin-rbLF-N,构建了原核和真核表达质粒,并进行了蛋白的表达。以上研究结果为进一步构建性能优良的融合抗菌蛋白提供了一定的研究材料和理论基础。