第一部分由“公共引物”介导的多重PCR技术应用研究目的建立由“公共引物”介导的PCR反应体系及条件以期进一步用于多重PCR体系的建立。方法以噬菌体基因组为参考序列设计“公共引物”序列,并以人类基因组为模板检测“公共引物”结合“嵌合引物”的特异性及灵敏性。结果“公共引物”具有高特异性、高敏感性的特点,“公共引物”结合“嵌合引物”PCR反应体系可大幅降低“嵌合引物”浓度。结论由“公共引物”介导的PCR反应体系可大幅降低引物间相互作用概率,为多重PCR体系的建立奠定基础。第二部分突变敏感性“分子开关”检测p53、HBB基因热点突变目的利用突变敏感性“分子开关”技术建立对p53、HBB基因热点突变的检测体系。方法利用PCR及基因克隆技术得到p53、HBB基因野生及突变模板质粒。设计硫化修饰引物,利用突变敏感性“分子开关”技术对突变位点进行检测。结果当硫化修饰检测引物与突变模板配对时,反应得以进行,有PCR产物；与野生模板不配对时,反应非成熟性终止,无PCR产物。结论突变敏感性“分子开关”技术能够快速检测p53、HBB基因突变位点,达到非此即彼的二元化效果。第三部分TALENs蛋白酶在艾滋病基因治疗应用的前期研究目的构建具有剪切CCR5基因的TALENs(?)泉病毒包装载体,并建立相应的蛋白酶活性检测系统。方法利用PCR技术结合限制性内切酶将目的基因片段定向克隆至载体中,结合绿色荧光蛋白检测重组TALENs蛋白酶活性。结果TALENs蛋白酶已定向克隆至载体中,细胞转染结果表明重组TALENs蛋白酶具有较高的酶切效率。结论成功构建TALENs (?)泉病毒包装载体,并建立相应蛋白酶活性检测体系。