我国原发性肝癌病死率占所有恶性肿瘤的第二位，占全部恶性肿瘤死亡人数的18.8％。乙型肝炎、肝炎后肝硬化则是我国肝癌发病率和死亡率居高不下的主要原因。虽然手术切除仍是可能获得治愈的主要方法，但根治性切除后转移复发率仍然相当高。这是肝癌病人临床治疗失败的主要原因，也是提高病人生存率和影响预后的重要障碍。因此从分子机制入手，理解调控转移的过程及转移细胞与器官微环境之间的复杂作用，已成为国内外研究的重点，并为有效的治疗设计提供了生物学基础和靶点。转移的形成是多因素、多阶段、非随机和高度选择的过程。肿瘤细胞异质性是其转移的生物学基础。要形成转移瘤，肿瘤细胞必须完成转移过程的所有步骤，并且依赖于转移细胞与宿主稳态机制多重复杂的相互作用。只有当合适的肿瘤细胞（种子）与特定的组织器官（土壤）提供的生长环境有特殊的亲和力时才会形成转移瘤。在原发性肝癌发生肝外器官的血道转移中，肺为常见的转移部位(约占血道转移的90%)。我所新近率先建成的具有高低转移潜能的人肝癌细胞株（MHCC97-H、MHCC97-L）主要发生肺转移和肝内播散，其转移能力具有显著的差异。本课题旨在从原发性肝癌器官特异性转移这一角度出发，通过比较小鼠不同组织粗提物诱导MHCC97-H、MHCC97-L移动侵袭能力，验证"种子"与"土壤"学说这一理论，并初步探讨其可能的机制。此外利用蛋白质纯化技术从中筛选纯化出能促进MHCC97-H移动和侵袭的相关分子，为建立干预宿主微环境与肿瘤细胞相互作用这一新的治疗肝癌模式提供靶点。 第一部分肺组织粗提物促进人原发性肝癌细胞移动侵袭的研究基于肺是肝癌肝外转移的最好发部位这一事实，本部分工作的主要目的是探讨宿主微环境与肝癌器官特异性转移的关系。首先制备C57BL/6小鼠的肺，肝，脾，肾组织粗提物，利用体外Boyden小室趋化侵袭实验，分别比较各种组织粗提物诱导高低转移潜能的人原发性肝癌细胞株MHCC97-H、MHCC97-L移动和侵袭能力。结果肺、肝、脾、肾组织粗提物及无血清培养液诱导高转移细胞株MHCC97-H细胞移动侵袭的细胞数分别是64±10、6±2 、3±1、22±4 和1±0。肺、肝、脾、肾组织粗提物及无血清DMEM诱导MHCC97-L穿过下室的细胞数分别是20±6、2±0、1±1、6±2和0±0。与肝、<WP=6>脾、肾组织粗提物相比，肺组织粗提物具有显著诱导MHCC97-H、MHCC97-L移动侵袭能力，差异有非常显著性(P<0.001)。与低转移潜能的细胞株MHCC97-L相比，肺组织粗提物具有显著诱导高转移潜能细胞株MHCC97-H移动侵袭能力，差异有非常显著性 (P<0.001)。 肺组织粗提物浓度在1g/L时表现为最强的诱导MHCC97-H细胞移动侵袭能力。上述结果验证了"种子"与"土壤"这一学说。并且证实了MHCC97细胞系在体内模型的转移特点。提示肺组织粗提物中存在某种可溶性因子促进人原发性肝癌细胞的移动侵袭能力，宿主微环境影响原发性肝癌器官特异性转移。第二部分肺组织粗提物影响人原发性肝癌细胞侵袭转移机制的初步探讨在体外趋化侵袭实验中，降解Matrigel和具有移动能力是肿瘤细胞穿过滤膜的前提。蛋白水解酶和细胞形成侵袭性伪足与肿瘤细胞的侵袭性行为密切相关。本部分工作主要目的在于从移动和侵袭两个方面探讨了肺组织粗提物影响人原发性肝癌器官特异性转移机制。将制备好的C57BL/6小鼠的肺、脾组织粗提物分别与MHCC97-H、MHCC97-L共培养24小时，收集培养的上清，用明胶酶谱法检测其基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）分泌水平。采用F型肌动蛋白聚合试验和流式细胞仪分析C57BL/6小鼠肺组织粗提物诱导人肝癌细胞的细胞骨架变化。利用双重荧光染色分析肺组织粗提物作用后的人肝癌细胞F型肌动蛋白和MMP-9分布关系。结果在无血清培养液培养条件下，MHCC97-H和MHCC97-L均分泌较少MMP-9(IOD值为2.1±0.2和 1.4±0.1)，不分泌MMP-2；但MHCC97-H分泌活性型MMP-9(IOD值17.4±2.2)显著高于MHCC97-L(6.7±0.2)，差异有显著性（P<0.001）。免疫荧光细胞化学法示MMP-9在MHCC97-H中的荧光表达强于在MHCC97-L表达。与无血清培养液培养条件下MMPs分泌相比，肺组织粗提物孵育后的MHCC97-H和MHCC97-L分泌MMP-9、活性型MMP-9和MMP-2均显著增高（P<0.001）；MHCC97-H分泌MMP-9（18.8±1.2）、活性型MMP-9（100.1±1.1）、MMP-2（22.4±1.3）均显著高于MHCC97-L（7.8±0.3、40.8±2.2和8.2±0.4）（P<0.001）。脾组织粗提物孵育后的MHCC97-H和MHCC97-L不分泌MMPs。MHCC97-H或MHCC97-L与肺组织粗提物孵育后，随时间的增加，细胞伪足增多。流式细胞仪结果示F型肌动蛋白在30秒内分别增加1.9倍和1.7倍。MHCC97-H或MHCC97-L与脾组织粗提物孵育后，无伪足生成。MHCC97-H<WP=7>或MHCC97-L与脾组织粗提物孵育后，流式细胞仪结果示F型肌动蛋白在30秒内分别增加2.3倍和1.1倍。激光扫描共聚焦显微镜观察MHCC97-H悬液示F型肌动蛋白从细胞外周浓染到重新分布于细胞的导引侧。无血清培养液孵育MHCC97-H后，MMP-9和F型肌动蛋白主要位于细胞的核周池。肺组织粗提物与MHCC97-H孵育后，MMP-9则表达于伪足的前端。上述结果表明不同转移潜能的人肝癌细胞分泌基质金属蛋白酶