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目的: 基于基因敲除小鼠哮喘模型,明确金属硫蛋白2在针刺抗哮喘效应中的重要作用及在哮喘发病机制中的关键作用。 方法: 1.通过剪尾PCR法鉴定金属硫蛋白2基因敲除小鼠基因型,上游引物为5-TCACCAGATCTCGGAATGG-3,下游引物为5-AAGAACCGGAATGAATCGC-3; 2.腹腔注射卵蛋白(OVA,100μg/只)致敏,2周后雾化吸入OVA(100μg/只)激发,建立小鼠哮喘模型,检测小鼠呼吸功能、肺泡灌洗液白细胞分类计数、肺组织病理学等参数,比较基因敲除小鼠和野生型小鼠呼吸功能和炎症改变; 3.选取大椎、风门(双侧)、肺俞(双侧)穴,自致敏第二天开始隔天针刺,检测小鼠呼吸功能、肺泡灌洗液白细胞分类计数、肺组织病理学等参数,明确针刺对MT-2基因敲除小鼠呼吸功能和炎症的影响。 结果: 1.PCR检测结果提示:MT-2基因敲除纯合子小鼠PCR产物长度为176bp,同窝野生型小鼠PCR产物长度为161bp,杂合子小鼠PCR产物含176bp/161bp两条带,可明确区分MT-2基因敲除纯合子、同窝野生型和杂合子小鼠。 2.基础状态下,基因敲除小鼠气道阻力值为5.74±0.89,野生型小鼠气道阻力值为6.26±1.65(P=0.000);肺泡灌洗液白细胞五分类计数中,基因敲除小鼠嗜酸粒细胞百分比为12.83±1.75;嗜碱性粒细胞百分比8.90±2.02;单核细胞百分比9.62±1.96;淋巴细胞百分比为50.48±3.29;中性粒细胞百分比为18.17±1.40。同窝野生型组,嗜酸粒细胞百分比为15.07±1.80;嗜碱性粒细胞百分比9.90±2.41;单核细胞百分比10.81±2.47;淋巴细胞百分比为49.96±2.68;中性粒细胞百分比为14.25±2.58。肺部病理切片均无明显炎性细胞浸润。 3.OVA激发后,基因敲除小鼠气道阻力值为175.85±22.43,野生型小鼠气道阻力值为95.55±10.85(P=0.007);基因敲除小鼠嗜酸粒细胞百分比为13.53±1.81;嗜碱性粒细胞百分比12.03±2.46;单核细胞百分比9.83±2.44;淋巴细胞百分比为52.34±5.29;中性粒细胞百分比为12.27±2.86。同窝野生型组,嗜酸粒细胞百分比为14.99±1.76;嗜碱性粒细胞百分比7.56±2.59;单核细胞百分比7.37±1.85;淋巴细胞百分比为53.86±2.86;中性粒细胞百分比为16.23±3.21。肺部病理切片均无明显炎性细胞浸润。 4.针刺后,基因敲除小鼠气道阻力值为82.48±8.71,野生型小鼠气道阻力值为51.18±9.92(P=0.064);基因敲除小鼠嗜酸粒细胞百分比为11.33±1.72;嗜碱性粒细胞百分比9.00±2.76;单核细胞百分比7.95±4.80;淋巴细胞百分比为57.60±6.93;中性粒细胞百分比为14.13±4.52。同窝野生型组,嗜酸粒细胞百分比为14.36±1.68;嗜碱性粒细胞百分比10.40±3.72;单核细胞百分比9.66±2.56;淋巴细胞百分比为51.73±3.81;中性粒细胞百分比为13.86±2.03。肺部病理切片均无明显炎性细胞浸润。 结论: 1.哮喘模型制备后,基因敲除小鼠哮喘模型组气道阻力值变化值显著高于同窝野生型,提示金属硫蛋白2在哮喘发病过程中发挥关键作用; 2.针刺后,两组小鼠哮喘模型针刺组气道阻力变化值均较哮喘模型组显著性降低,即针刺治疗哮喘有效,非依赖金属硫蛋白2途径,可能存在其他调节通路。