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麻黄源于《神农本草经》,为麻黄科植物草麻黄EphedrasinicaStapf、中麻黄EphedraintermediaSchrenketC.A.Mey.或木贼麻黄EphedraequisetinaBge.的干燥草质茎,其味辛、苦,性温,主入肺、膀胱经。具有解表散寒,宣肺平喘,利水消肿的功效,善发散肌表风寒,古为发汗解表之要药。《名医别录》:“通腠理,解肌”。《本草纲目》:“张仲景治伤寒,无汗用麻黄,有汗用桂枝”,表明麻黄发汗作用较强,现代药理研究也表明,麻黄有效成分麻黄碱能促使大鼠足底部发汗,麻黄碱对汗腺有显著的兴奋作用,其发汗部位主要在中枢[1]。
麻黄具有很强的发汗作用,世人皆知。但炮制方法、煎煮时间、药液温度、环境温度及配伍等相关因素发生变化时,其发汗作用是否受到影响,目前尚未见诸相关报道。故本实验以麻黄作为研究对象,从定性及定量两个方面观察其煎煮时间、给药后时间、炮制、配伍等相关因素对其发汗作用,同时检测不同影响因素下麻黄碱的煎出量,并进行麻黄碱的含量与其发汗作用的相关性研究,旨在为今后临床合理规范应用麻黄提供科学依据。
第一部分相关因素对麻黄发汗作用影响的实验研究
目的:观察煎煮时间、给药后时间段、炮制方法及配伍桂枝或苍术等因素对麻黄发汗作用的影响。
方法:将SD大鼠随机分为A(空白)组20只、B(生麻黄煎煮及服药后时间)组60只、C(炮制)组40只,D(配伍)组40只;其中A组包括A1(给药后30min)组,A2(给药后60min)组;B组包括B1(煎煮15min)组,B2(煎煮30min)组,B3(煎煮45min)组;C组包括C1(炙麻黄)组,C2(麻黄绒)组;D组包括D1(麻黄配桂枝)组,D2(麻黄配苍术)组。除A组大鼠灌服等量生理盐水外;B1、B2、B3组分别给大鼠灌服生麻黄煎煮15min、30min、45min药液,并分别于给药后30min或60min时从定性与定量两方面,观察大鼠足后趾肉垫汗腺着色点数和汗腺分泌量。根据B组发汗实验结果,C、D组设定实验条件为煎煮时间30min以及于给药后30min时,观察大鼠足后趾肉垫汗腺着色点数和汗腺分泌量。C1、C2组分别灌服炙麻黄及麻黄绒药液;D1、D2组分别灌服麻黄配桂枝、麻黄配苍术药液。
结果:在给药液温度、室温相同的前提下,(1)与A组相比,B组不论定性观察大鼠足后趾肉垫汗腺着色点数目,还是定量测定大鼠足后趾肉垫汗腺分泌量,其发汗作用均明显增加(P<0.01)。B2组发汗作用明显好于B1、B3组(P<0.01);B3组发汗作用优于B1组(P<0.01)。给药后30min组明显好于60min组(P<0.01)。(2)与A1组相比,C组大鼠不论定性还是定量观察,其发汗作用均明显增加(P<0.01);与同等条件B2组相比,C组发汗作用减弱(P<0.01);C1组优于C2组(P>0.01)。(3)与A1组相比,D各组定性观察大鼠足后趾汗腺着色均变深,清晰,分布均匀,数目显著增多(P<0.01),汗腺分泌量显著增多(P<0.01)。与同等条件B2组相比,D各组大鼠足后趾汗腺着色数目及汗腺分泌量均显著增加(P<0.01)。D1与D2组间相比无显著性差异(P>0.05)。
结论:(1)生麻黄具有明显的发汗作用;在煎煮30min,及给药后30min条件下,发汗作用尤为显著。(2)蜜制或制绒炮制方法均有减弱麻黄发汗的作用。(3)配伍等比例桂枝、或苍术对麻黄的发汗较单味药均有明显的促进作用。
第二部分相关因素对麻黄中麻黄碱煎出量的影响
目的:采用高效液相色谱法(HPLC)测定不同煎煮时间、炮制品及配伍桂枝或苍术后麻黄中麻黄碱的煎出量变化,从而探讨麻黄中麻黄碱煎出量与其发汗作用的相关性,以更好的指导临床合理用药。
方法:采用高效液相色谱法,选用①色谱条件:选择合适的固定相,调整流动相的组成、配比、流速以使麻黄碱色谱峰与其它峰完全分离。②标准曲线的绘制:配制系列浓度的麻黄碱对照品溶液,分别进样,按含量测定方法测定峰面积,以麻黄碱对照品浓度为横坐标,相应峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。③精密度试验:精密量取麻黄碱对照品溶液,重复进样5次,在色谱条件下测定峰面积。④稳定性试验:精密量取同一份供试品溶液,在24小时内于不同时间注入高效液相色谱仪,分别测定峰面积。⑤重复性试验:精密量取同一份供试品溶液,平行进样5次,分别测定峰面积。⑥回收率试验:采用加样回收率测定法,取已知含量的样品溶液适量,每组分别加入适量的麻黄碱对照品,对所得样品分别进样,在上述色谱条件下测定峰面积,计算回收率。⑦样品含量测定:分别精密量取供试品溶液,在上述色谱条件下测定峰面积,计算其中麻黄碱含量。
结果:采用高效液相色谱法显示①色谱条件:色谱柱为Shimadzu-ODS色谱柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-(0.02%mol.L-1磷酸二氢钾+0.02%三乙胺+0.2%磷酸水溶液)=10∶90;流速为1.0ml.min-1;检测波长为210nm;进样量为10μl;柱温为室温。保留时间约为8.5min。②标准曲线的绘制:麻黄碱的浓度在0.0214~0.1069mg·ml-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为y=2×107x-3850.6,R2=0.9995(n=5)。③精密度试验:仪器的精密度良好,RSD值为0.72%(n=5)。④稳定性试验:样品在24小时内稳定,RSD值为0.47%(n=5)。⑤重复性试验:本方法重现性良好,RSD值为1.20%(n=5)。⑥回收率试验:麻黄碱平均回收率为99.27%,RSD值为0.69%(n=9),表明回收率较高,方法准确可靠。⑦样品含量测定:生麻黄煎煮15min麻黄碱的煎出量为0.76mg/g,煎煮30min为0.95mg/g,煎煮45min为0.90mg/g;与生麻黄煎煮30min相比,煎煮15min时麻黄碱煎出量降低20.00%,煎煮45min时降低5.62%。炙麻黄为0.81mg/g,麻黄绒为0.60mg/g;与生麻黄煎煮30min相比,炙麻黄减少14.74%,麻黄绒减少36.84%。麻黄配桂枝为1.98mg/g,麻黄配苍术为1.87mg/g;与生麻黄煎煮30min相比,麻黄配伍桂枝增加108.42%,配伍苍术增加96.84%。
结论:(1)高效液相色谱(HPLC)法所建立的方法精密度、稳定性、重复性良好,回收率高,可以作为麻黄中麻黄碱的煎出量的定量检测方法。(2)生麻黄在煎煮30min时麻黄碱煎出量较高。(3)配伍等比例的桂枝或苍术其麻黄碱的煎出量明显优于单味药。(4)实验结果表明麻黄碱是麻黄发汗的主要物质基础。