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本论文主要研究了黄皮种子的甲醇提取物对松材线虫的毒杀活性,实验结果表明黄皮种子的甲醇提取物对松材线虫有较好的毒杀活性,从黄皮种子的甲醇提取物中分离出一活性化合物,并对其杀松材线虫的作用机理进行了初步研究。
对黄皮的花、种子、树皮和枝叶干粉进行超声波提取,提取结果表明,叶的提取率最高,为21.75%,树皮和种子的提取率为20.37%和18.40%,花的提取率为9.27%。进一步采用药液浸泡法对其甲醇提取物对松材线虫进行生物活性测定,在1 mg/mL、3mg/mL、5 mg/mL的处理浓度下,种子的甲醇提取物对松材线虫毒杀活性最高,其在1mg/mL处理浓度下,72 h的校正死亡率为100%,叶、花和树皮的活性次之,分别为47.04%、45.69%、43.64%。黄皮种子甲醇提取物对松材线虫毒杀活性测定试验结果表明,其提取物24 h、48 h、72 h对松材线虫毒力LC<,50>值分别为14840.70 mg/L、1181.84 mg/L、97.23 mg/L。
采用液-液分配萃取法对大量浸提的黄皮种子甲醇提取物进行初步分离,得到石油醚相、三氯甲烷相、乙酸乙酯相、正丁醇相、水相等萃取物。结果表明,石油醚相萃取物的毒力最高,对松材线虫72 h的LC<,50>值为89.34mg/L,氯仿相次之LC<,50>值为6206.38 mg/L。
将石油醚相萃取物进行柱层析,分离得到12个馏分,在0.05mg/mL和0.1mg/mL的处理浓度下进行活性测定,结果表明,馏分4和馏分5对松材线虫的活性显著的高于其它的馏分,与对照差异显著。在两种处理浓度下,馏分4对松材线虫72 h的校正死亡率都为100%,馏分5的为95.45%和98.03%。
馏分4经薄层层析后,得到一个黄色晶体,通过核磁共振氢谱和碳谱分析,证实该化合物分别为lansiumamide B,是一种肉桂酰胺类化合物。Lansiumamide B处理松材线虫24 h、48 h、72 h的LC<,50>值分别为8.38mg/L、6.36mg/L、5.38mg/L,表明该化合物在试验的测定条件下对松材线虫有很好的毒杀活性。馏分5所得晶体化合物处理松材线虫在100 mg/L浓度下与对照差异不显著。
通过高效液相色谱测定了该化合物在黄皮的花、叶、树皮和种子干粉中的含量,结果表明化合物lansiumamide B在叶和树皮干粉中的含量较少,分别仅为0.18%和0.29%,在花中的含量为1.12%,在种子中含量最高为5.42%。
LansiumamideB对松材线虫作用机理研究表明,随处理浓度的升高对松材线虫的乙酰胆碱酯酶具有激活作用,对过氧化氢酶则为逐渐抑制作用,对Na<+>-K<+>-ATP酶活性为先抑制后激活,然后又抑制的作用。对松材线虫的乙酰胆碱酯酶激活作用而导致细胞调亡可能是其作用机理之一。
研究发现lansiumamide B对淡色库蚊(Culex pipiens)幼虫的杀灭活性较好,在12.5 mg/L、25 mg/l、50 mg/L三个浓度处理24 h后,对淡色库蚊幼虫校正死亡率分别为62%、88%、100%。处理48 h的校正死亡率均为100%。
作为一种肉桂酰胺类化合物lansiumamide B在植物源杀线虫剂及其杀淡色库蚊幼虫方面有很大的开发和应用前景。