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在蛋白质的修饰中,乙酰化扮演重要的角色,这种修饰从酵母到植物广泛存在。从生物生长发育,细胞增殖,损伤修复中,有重要的影响,其乙酰化与组蛋白的去乙酰化,存在动态平衡,其起关键作用的酶,乙酰基转移酶(HATs)和去乙酰化酶(HDACs)扮演着重角色,其去乙酰化酶可以分成4个家族为RPD3、HDA1、HD2以及SIR2家族,在不同类型的生物中有特别的作用。SIR2家族作为一个NAD+依赖型组蛋白去乙酰化酶家族而熟知,它的结构与其他家族成员的结构不同,也没有序列同源性,这同时也暗示了,SIR2组蛋白去乙酰化酶具有特别的功能活性,已经研究表明SIR2家族在染色体的修饰,染色体结构的改变,均具有作用,但是对于该家族在植物生长发育的作用,特别是在植株胁迫方面的作用却鲜为人知。 本研究以SIR2家族的水稻OsSRT1乃登录号(AK069000.1)基因为研究对象,首先Biozol法提取水稻总RNA,通过NCBI已知序列用软件设计引物,通过RT-PCR手段扩增得到一段专一特异片段,经过测序ORF片段全长为1453bp,与已知序列片段相似度达99%,为了进一步分析该基因在生长发育特别是在逆境的功能,利用Gateway的试剂盒构建到植物表达载体pGWB2得到pGWB2-OsSRT1;利用电转化法将pGWB2-OsSRT1转移到农杆菌中去;通过鉴定该表达载体成功转入农杆菌工程菌株中作为转基因的工程菌株;利用农杆菌介导法把该pGWB2-OsSRT1载体转移到模式生物拟南芥中,对转基因植株T0抗性筛选,以及分子鉴定,确定阳性植株。转基因植株的脯氨酸测定:分别把野生型WT、pB2、转基因型T2-OsSRT1-2试验材料在正常MS培养基培养2周后以0、50、100、150mmol/LNaCl胁迫处理一周后测定脯氨酸浓度变化,结果显示转基因型T2-OsSRT1-2在150mmol/L时脯氨酸的积累程度最大,分别是野生型和pB2的1.39和1.47倍,在甘露醇胁迫下脯氨酸的含量变化较为明显,在200mmol/L甘露醇下,转基因型T2-OsSRT1-2分别是野生型与pB2的1.37和1.11倍,在10mmol/L H2O2,转基因型T2-OsSRT1-2分别是野生型与pB2的1.12和1.2倍。转基因植株的可溶性蛋白的测定:同样的培养方式,在上述浓度的NaCl处理,结果显示在100mmol/L NaCl T2-OsSRT1-2转基因型的可溶性蛋白的含量最高,分别是野生型与pB2的1.05和1.13倍,在150mmol/L NaCl时,三者的可溶性蛋白含量均有所下降,但是转基因型的下降幅度较小,同样的处理方式下在0~200mmol甘露醇胁迫下,可溶性蛋白的含量逐级递增,在200mmol/L时达到了最大值,分别是野生型与pB2型的1.10倍与1.08倍,另外在用H2O2胁迫时,在7.5mmol/L时可溶性蛋白的积累量最大,转基因型T2-OsSRT1-2是野生型与pB2的1.28倍和1.09倍。转基因植株的CAT和POD酶的活性测定:在上述培养条件下50mmol/LNaCl处理CAT的酶活性三者的差异较大,转基因型T2-OsSRT1-2分别是野生型与pB2的1.34和1.19倍,在150mmol/L处理,POD酶的活性差异较大,转基因型T2-OsSRT1-2分别是野生型与pB2的1.27和1.37倍,另外在甘露醇200mmol/L时,转基因组CAT的酶活性较大,分别是野生型与pB2型的1.12与1.07倍,在H2O210mmol/L,CAT酶活性,转基因型T2-OsSRT1-2分别是野生型与pB2型的1.32和1.25倍。