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目的研究尼美舒利(nimesulide,NIM)在体外对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231生长抑制和诱导凋亡的作用,及联合赫塞汀(Herceptin)的协同作用,并对其机制做进一步探讨。方法以不同浓度的尼美舒利溶液(50、100、200、400μmol/L)处理对数生长期的人乳腺癌MDA-MB-231细胞,应用MTT比色法检测OD值,计算对照组和各实验组MDA-MB-231细胞的抑制率,并筛选最适宜的尼美舒利IC50;应用流式细胞技术对NIM作用后的MDA-MB-231细胞进行细胞周期分析,计算细胞凋亡率;免疫组化法检测MDA-MB-231细胞中Bcl-2、Bax、Cox-2蛋白表达的变化;RT-PCR半定量检测MDA-MB-231细胞COX-2 mRNA及C-erbB-2 mRNA的表达水平,以研究NIM诱导MDA-MB-231细胞凋亡的机制及NIM与Herceptin协同作用的机制;用ELISA法检测细胞培养液上清中PGE2水平的变化。结果MTT法显示尼美舒利可明显抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长并具有浓度、时间依赖性,NIM浓度为200μmol/L作用48h的抑制率约为51.3%;流式细胞技术检测显示亚二倍体亚G1峰-凋亡峰(AP峰),定量分析显示,浓度为50、100、200、400μmol/L的尼美舒利作用48h后诱导细胞产生的凋亡率分别为6.94±1.02%,12.10±1.51 %,30.27±1.98%, 38.27±3.03 %,与阴性对照组相比,有显著差异(P<0.05)。细胞周期分析显示,随着药物浓度的增高,处于G1/G0期细胞比例上升,S期及G2期细胞比例下降;免疫组织化学结果显示,对照组细胞胞浆内可见大量棕黄色颗粒,染色较深,提示COX-2和Bcl-2蛋白高表达,尼美舒利浓度逐渐增加处理48h后观察,细胞形态不规则,表达棕黄色颗粒的细胞数逐渐减少,且染色也逐渐减淡,提示在尼美舒利作用下,COX-2和Bcl-2蛋白的表达逐渐下降,而Bax蛋白表达水平随着作用药物浓度增加,产生棕黄色颗粒的阳性细胞逐渐增多;尼美舒利处理MDA-MB-231细胞48h后,RT-PCR检测结果提示肿瘤细胞COX-2mRNA及C-erbB-2mRNA的表达呈浓度依赖性降低;NIM与Herceptin联合作用后,COX-2mRNA及C-erbB-2mRNA的表达水平明显下降;细胞培养液上清中PGE2浓度下降了57.2%。结论尼美舒利可明显抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,且呈时间、剂量依赖性。尼美舒利抗肿瘤的作用机制除了其对COX-2抑制作用外,还可能与下调Bcl-2、上调Bax的表达有关。与赫塞汀联合,可明显增强抑癌效果。