目前，微生物脂肪酶的应用越来越受到人们的关注，在洗涤剂、手性化合物合成、造纸、生物医药等领域有越来越广泛的应用。枯草芽孢杆菌产生的脂肪酶是已知分子量最小的脂肪酶，它作用的底物范围广，酶学特性优良，有较大的潜在工业应用价值。利用枯草芽孢杆菌和其内源的lipA基因，构建过量表达LipA的枯草芽孢杆菌基因工程菌株，是实现枯草芽孢杆菌脂肪酶大规模工业发酵生产的关键环节。枯草芽孢杆菌DB104是中性金属蛋白酶和碱性丝氨酸蛋白酶缺陷菌株，能够很大程度上减少所表达的胞外蛋白的降解，适于做为过量表达脂肪酶的基因工程受体菌。本文采用对枯草芽孢杆菌DB104，lipA基因启动子进行原位修饰的方法，使其启动子-35区和-10区序列与强启动子的-35区和-10区共同序列相一致，而达到lipA基因高水平表达的目的。 本文以枯草芽孢杆菌DB104为出发菌株，采用同源重组的方法，用红霉素抗性基因替换了lipA基因启动子区及部分上游序列，构建了lipA缺陷并带有红霉素抗性的菌株SH-1，作为修饰lipA基因启动子的受体菌。然后采用重叠PCR的方法构建了带有被修饰的lipA启动子的同源重组片段Ln，并连接到质粒pUC18上，构建了重组质粒puC18-Ln。用pUC18-Ln转化SH-1，在橄榄油基本培养基上筛选出了能够利用橄榄油作为唯一碳源生长的转化子。对转化子在表型和分子水平上的鉴定结果表明，转化子染色体上的lipA基因启动子的-35区和-10区实现了预定修饰，其序列与共同序列一致，所获得的重组菌命名为枯草芽孢杆菌SH-2。SH-2能够在以橄榄油为唯一碳源的基本培养基上生长，没有红霉素抗性。摇瓶发酵显示，SH-2发酵12小时，培养基中的脂肪酶活性达到最高90.80U/L，比出发菌株DB104的酶活21.62U/L提高了4.2倍。