论文部分内容阅读
莪术为姜科植物蓬莪术,广西莪术和温郁金的干燥根茎,具有顺血调气,消肿止痛的功能,而吉马酮则为莪术挥发油中主要的活性成分。经研究报道,莪术挥发油具有良好的抗肿瘤、抗炎、抗病毒作用,并且有研究表明吉马酮具有显著抑癌效果,但尚未对其抗癌作用机制展开深入研究。本文以肝癌HepG2细胞作为研究材料,通过Western blotting,RT-PCR,以及流式细胞检测等方法研究吉马酮对HepG2细胞的增殖影响,主要研究结果有以下几个方面:(1)吉马酮剂量和时间依赖性地抑制肝癌HepG2细胞增殖。通过MTT比色法进行测定,其结果表明吉马酮能够显著抑制HepG2细胞的增殖,并且药物浓度越高,时间作用越长,其抑制效果越明显。当浓度高于160μM时,其细胞抑制效果无明显统计学差异。药物处理48小时与处理24小时相比,没有呈现时间依赖性。(2)吉马酮对HepG2细胞处理后呈现G2/M期周期阻滞。不同浓度吉马酮处理肝癌HepG2细胞后,进行PI单染,通过流式细胞仪检测细胞周期后呈现G2/M期阻滞。运用RT-PCR和Western Blotting技术检测G2/M期关键基因CyclinB1和CDK1的表达情况,其结果表明吉马酮能够显著抑制CyclinB1和CDK1在转录和翻译水平上的表达。随着吉马酮浓度的提高,CyclinB1和CDK1的表达量下降,而且细胞周期阻滞在G2期,说明吉马酮通过调节CyclinB1和CDK1的表达来诱导细胞G2/M期阻滞从而抑制癌细胞增殖。(3)通过Western Blotting检测吉马酮对抑癌基因P53表达情况,并检测凋亡相关基因Bcl-2家族中的Bax、Bcl-2的影响,其结果显示吉马酮能够增强抑癌基因P53的表达,并促进促凋亡因子Bax的表达量上升,抗凋亡因子Bcl-2的表达量随药物浓度增加而下降。(4)通过Hoechst33258染色检测吉马酮对HepG2细胞发生凋亡的影响,结果表明着色细胞明显增多,并且通过PI/Annexin V双染流式检测吉马酮对HepG2细胞发生凋亡的影响,结果发现正常细胞比例明显下降,早期凋亡和晚期凋亡细胞比例明显上升,这些结果都说明吉马酮能够促进HepG2细胞发生凋亡。(5)通过Western Blotting检测JAKs/STATs信号通路中p-JAK2和p-STAT3的表达情况,结果表明p-JAK2和p-STAT3的表达量随着药物浓度的增加而下降,说明吉马酮能够能够有效抑制JAK2/STAT3信号通路的异常活化,从而达到抑制肿瘤发生的目的。通过以上结果表明,吉马酮具有显著的抑癌效果,并且副作用小,为肝癌的治疗提供了新的思路。