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益生菌制剂以其无毒、无耐药性、无残留以及效果显著、成本低、能有效补充消化道内的有益微生物等诸多优点,已成为了理想的抗生素替代品而被广泛应用。近来的研究表明,高活菌制剂的功效和安全性,其关键则是生产菌株的选择；另外多菌种混合剂型的研究也显得非常重要。本论文通过从猪的粪便中分离鉴定益生菌,进行乳酸菌耐酸、耐胆盐试验与体外抑制致病性大肠杆菌试验,研究不同复合益生菌制剂对断奶仔猪生产性能、抗氧化能力、肠道菌群以及免疫功能等的影响,最后研究复合益生菌制剂的发酵工艺,对为实现其产品的产业化,推动饲料添加剂产品向高效、无公害的方向发展,实现畜产品的绿色化具有重要的应用意义。各试验的研究内容如下：试验1猪源益生乳酸菌的分离鉴定从健康猪的20份新鲜粪便中分离到一定范围的乳酸菌共37株。应用常规形态学、生化鉴定(自动细菌检测仪)和分子鉴定方法进行鉴定。结果表明：分离到的37株乳酸菌包括3株嗜酸乳杆菌(L. acidophilus),5株罗伊氏乳杆菌(L reuteri)、5株动物乳杆菌(L. animalis)、4株鼠李糖乳杆菌(L. rhamnosus)、3株肠膜样明串珠菌(L. mesenteroides)、3株格氏乳球菌(L. garvieae)、3株乳酸乳球菌乳酸亚种(L. subsp. lactis)、2株嗜热链球菌(S. thermophilus)、5株屎肠球菌(E. faeciμm)和4株粪肠球菌(E. faecalis)。这一结果为新型猪用复合微生态制剂的研制与开发提供了基础条件。试验2猪源乳酸菌耐酸、耐胆盐试验与体外抑制致病性大肠杆菌作用研究对从健康仔猪新鲜粪便分离的12株乳酸菌菌株进行耐酸试验和耐胆盐试验,筛选出4株有效菌株。分别将这4株乳酸菌单独、混合与K88共培养；取4种乳酸菌单独和混合培养的菌液、发酵滤液和菌体用牛津杯做K88抑制试验；分别将培养滤液经过乳酸脱氢酶和碱处理做K88抑制试验。结果表明：4种乳酸菌皆具有抑菌功能,但相互之间有差异；用乳酸脱氢酶或碱处理后抑菌能力明显下降,说明乳酸菌是通过产生有机酸尤其是乳酸对K88进行有效抑制。4种菌混合培养的抑菌能力强于单独培养。试验3不同复合益生菌制剂对断奶仔猪生产性能及抗氧化能力的影响为了研究不同复合益生菌制剂对断奶仔猪生产性能及抗氧化能力的影响,选取4周龄健康杜×长x大三元杂交断奶仔猪60头,随机分成5组,每组3个重复,每个重复4头。A组为饲喂基础日粮的对照组,B组为饲喂基础日粮加市售的某公司生产的猪用益生菌制剂组,C、D、E组为基础日粮分别加3种不同的自制复合益生菌产品试验组。试验结果表明,添加C组、D组、E组益生菌制剂能显著改善仔猪的生长性能,提高断奶仔猪的日增重和饲料转化效率,其中试验组C组仔猪日增重与对照组相比提高18.03%(P<0.05),料肉比下降了8.86%(P<0.01),试验组D组仔猪日增重提高16.52%(P<0.05),料肉比下降了8.12%(P<0.05),试验组E组仔猪日增重提高15.34%(P<0.05),料肉比下降了7.75%(P<0.05)；添加C组、D组、E组益生菌制剂能显著改善仔猪全血中的GSH-PX的活性和血清中SOD的活性,显著降低血清中的MDA含量,说明提高了断奶仔猪的抗氧化能力,其中C组、D组效果较好。试验4不同复合益生菌制剂对断奶仔猪肠道菌群及免疫功能的影响为了研究益生菌对断奶仔猪肠道菌群及免疫功能的影响,选取4周龄健康杜×长×大三元杂交断奶仔猪60头,随机分成5组,每组3个重复,每个重复4头。A组为饲喂基础日粮的对照组,B组为饲喂基础日粮加市售的某公司生产的猪用益生菌制剂组,C、D、E组为基础日粮分别加3种不同的自制复合益生菌产品试验组。试验结果表明,添加益生菌的各试验组粪便中大肠杆菌的含量降低,乳酸菌的含量增加,显示了其对大肠杆菌等肠道致病菌有良好的抑制作用；在提高动物机体免疫力方面,C组、D组益生菌制剂能促进ConA非特异性刺激外周血液T淋巴细胞的转化,C组、D组T淋巴细胞转化水平分别提高了20.4%和17.53%(p<0.05),C组、D组、E组益生菌制剂还能有效提高仔猪血清中的细胞因子IL-2和TNF-α水平。试验5复合益生菌制剂发酵条件的优化本实验通过将4株益生菌单独和混合培养,测定各株益生菌的活菌数来评价了4株益生菌的共生关系；比较了复合益生菌在YEPD、MRS、麦芽汁和豆面粉培养基上的生长状况,筛选出了可用于工业化生产复合益生菌制剂的培养基；并对该培养基中豆面粉比例作了优化,筛选出最佳搭配比例；同时通过单因子试验和正交试验对复合益生菌制剂工业化生产的工艺条件作了优化,确定了最优的生产条件。结果表明4株益生菌能较好的共生；豆面粉培养基为工业化生产复合益生菌制剂较为适宜的培养基；该培养基中豆面粉最适比例为2%：8%；最佳的工业化生产条件为：发酵时间32h,接种量5%,发酵温度34℃,恒定pH6.0,溶氧DO40%。在上述最优培养条件下,4株益生菌活菌数均达到108CFU/mL以上。